Конфокална интравитална микроскопия на роговицата

Конфокалната микроскопия на роговицата е един от съвременните методи на изследване; позволява да се извършва интравитален мониторинг на състоянието на роговицата с визуализиране на тъкани на клетъчно и микроструктурно ниво.

Този метод, благодарение на оригиналния дизайн на микроскопа и неговата висока разделителна способност, позволява визуализиране на живите роговични тъкани , измерване на дебелината на всеки от неговите слоеве и оценка на степента на морфологични разстройства.

Целта на конфокалната микроскопия на роговицата

Характеризират морфологичните промени в роговицата, произтичащи от различни възпалителни и дистрофични заболявания, както и от хирургични интервенции и ефектите на CR.

Необходими са морфологични данни за оценка на тежестта на патологичния процес, ефективността на лечението и определяне на тактиката за управление на пациента.

Показания за процедурата

• Възпалителни заболявания на роговицата ( кератит ).
• Дистрофични заболявания на роговицата ( кератоконус, дистрофия на Фукс и др.).
• Синдром на "сухо око".
• Условия след хирургични интервенции на роговицата (чрез трансплантация на роговицата, кераторефрактивни операции).
• Условия, свързани с носенето на контактни лещи.

[1], [2], [3], [4]

Подготовка

Това проучване е възможно без използването на анестетици. На лещата на конфокалният микроскоп се поставя капка течност за потапяне. Това елиминира директния контакт на лещата с роговицата и минимизира риска от епителиално увреждане.

[5], [6], [7], [8], [9],

Техника конфокална микроскопия на роговицата

Изследването се провежда на конфокален микроскоп ConfoScan 4 (Nider) с увеличение от 500 пъти. Устройството ви позволява да изследвате роговицата по цялата й дебелина.

Размерът на изследваната зона е 440 × 330 μm, дебелината на сканиращия слой е 5 μm. Обектив с капка гел се довежда до роговицата, за да се докосне и да се настрои така, че дебелината на потапящия течен слой да е 2 mm. Дизайнът на устройството ви позволява да изследвате роговицата в централната зона и нейните парадоксални области.

Противопоказания за процедурата

Относителното противопоказание показва дразнене на окото на фона на остър възпалителен процес.

[10], [11]

Нормална работа

Нормална морфологична картина на роговицата

Предният епител се състои от 5-6 слоя клетки. Средната дебелина на целия епител е приблизително 50 μm. Според морфологичната структура се различават следните слоеве (отвътре навън): основна, сублитуална и повърхностна.

• Най-вътрешният (основен) слой е представен от малки плътни цилиндрични клетки без видимо ядро. Базовите клетъчни граници са ясни, ярки.
• Средният слой се състои от 2-3 слоя гръбначни (крилати) клетки с дълбоки инвагинации, в които се изграждат израстъци от съседни клетки. Микроскопично, клетъчните граници са доста добре различими и ядрата не могат да бъдат дефинирани или размити.
• Повърхностният слой на епитела е представен от един или два слоя полигонални клетки с ясни граници и хомогенна плътност. Ядрата обикновено е по-ярка от цитоплазмата, в която може да се разграничи и тъмният пръстен в близост до ядрото.

Сред клетките на повърхностния слой се прави разлика между тъмно и светло. Повишената отразяваща способност на епителните клетки показва намаляване на нивото на метаболизма в тях и началото на тяхната десквамация.

Бауманската мембрана е прозрачна структура, която не отразява светлината, така че е невъзможно да се визуализира, когато се извършва конфокална микроскопия.

Подбазният нервен плексус се намира под мембраната на Bowman. Обикновено нервните влакна приличат на ярки ивици, които се движат паралелно на тъмен фон, като се свързват помежду си. Отражението (отражение) може да бъде неравномерно по отношение на дължината на влакната.

Струята на роговицата заема 80 до 90% от дебелината на роговицата и се състои от клетъчен и извънклетъчен компонент. Основните клетъчни елементи на стромата са кератоцити; представляват приблизително 5% от обема.

Типичен микроскопски модел на стромата включва няколко ярко неправилни овални тяло (кератоцитни ядра), които лежат в дебелината на прозрачна тъмносива или черна матрица. Обикновено визуализирането на извънклетъчни структури е невъзможно поради тяхната прозрачност. Струята може условно да се раздели на подслойни: предна (разположена директно под мембраната на Bowman и представлява 10% от дебелината на страта), предна, средна и задната.

Средната плътност на кератоцитите е по-висока в предната строма, постепенно техният брой намалява към задните слоеве. Плътността на клетките на предната строма е почти два пъти по-голяма от тази на клетките на задната строма (ако плътността на клетките на предната строма се приема като 100%, тогава плътността на клетките на задната структура е около 53,7%). В предната строма, ядрата на кератоцитите имат кръгла форма на зърна, а в задния овал и по-продълговати.

Ядрото на кератоцитите може да се различава в яркостта. Различната способност за отразяване на светлината зависи от тяхното метаболитно състояние. По-светлите клетки се считат за активирани кератоцити ("стресови клетки"), чиято дейност е насочена към поддържане на вътрешната родова хомеостаза. В нормата и зрителното поле има единични активирани клетки.

Нервните влакна в предната строма на роговицата се визуализират като ярки хомогенни ленти, често образуващи бифуркации.

Отрязаната мембрана е обикновено прозрачна и не се визуализира чрез конфокална микроскопия.

Задният епител е монослой от шестоъгълни или полигонални плоски клетки с равномерно лека повърхност на фона на различни тъмни междуклетъчни граници.

Устройството осигурява възможност за ръчно или автоматично изчисляване на плътността на клетките, тяхната площ и коефициент на вариабилност.

Патологични промени в структурата на роговицата

Кератоконът се характеризира със значителни промени в предния епител и строма на роговицата.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]