Конфокална микроскопия на роговицата за целия живот

Конфокалната микроскопия на роговицата е един от съвременните методи на изследване; тя позволява интравитално наблюдение на роговицата с визуализация на тъканите на клетъчно и микроструктурно ниво.

Този метод, поради оригиналния дизайн на микроскопа и високата му разделителна способност, позволява визуализация на жива корнеална тъкан, измерване на дебелината на всеки от нейните слоеве и оценка на степента на морфологични нарушения.

Цел на конфокалната микроскопия на роговицата

Да се характеризират морфологичните промени на роговицата, които настъпват при различни възпалителни и дистрофични заболявания, както и в резултат на хирургични интервенции и излагане на CL.

Данните от морфологичното изследване са необходими за оценка на тежестта на патологичния процес, ефективността на лечението и за определяне на тактиката за управление на пациента.

Показания за процедурата

• Възпалителни заболявания на роговицата ( кератит ).
• Дистрофични заболявания на роговицата ( кератоконус, дистрофия на Фукс и др.).
• Синдром на сухото око.
• Състояния след хирургични интервенции на роговицата (пенетрираща трансплантация на роговицата, кераторефрактивни операции).
• Състояния, свързани с носенето на контактни лещи.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Подготовка

Това изследване може да се извърши без използване на анестетици. Върху обектива на конфокалния микроскоп се поставя капка имерсионна течност. Това елиминира директния контакт на лещата с роговицата и минимизира риска от увреждане на епитела.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Техника конфокална микроскопия на роговицата

Изследването се извършва с помощта на конфокален микроскоп ConfoScan 4 (Nider) с увеличение 500 пъти. Устройството позволява изследване на роговицата в цялата ѝ дебелина.

Размерът на изследваната област е 440×330 μm, дебелината на сканиращия слой е 5 μm. Лещата с капка гел се доближава до роговицата, докато я докосне, и се монтира така, че дебелината на слоя имерсионна течност да е 2 mm. Конструкцията на устройството позволява изследване на роговицата в централната зона и нейните парацентрални области.

Противопоказания за процедурата

Относително противопоказание е силно дразнене на очите, дължащо се на остър възпалителен процес.

[ 10 ], [ 11 ]

Нормална работа

Нормална морфологична картина на роговицата

Предният епител се състои от 5-6 слоя клетки. Средната дебелина на целия епител е приблизително 50 µm. Според морфологичната структура се разграничават следните слоеве (отвътре навън): базални, шиловидни клетки и повърхностни.

• Най-вътрешният (базален) слой е представен от малки, плътни, цилиндрични клетки без видимо ядро. Границите на базалните клетки са ясни и ярки.
• Средният слой се състои от 2-3 слоя бодливи (крилати) клетки с дълбоки вдлъбнатини, в които са вградени израстъците на съседните клетки. Микроскопски границите на клетките са доста ясно различими, а ядрата може да не са дефинирани или да са неясни.
• Повърхностният слой на епитела е представен от един или два слоя полигонални клетки с ясни граници и хомогенна плътност. Ядрата обикновено са по-ярки от цитоплазмата, в която може да се различи и перинуклеарен тъмен пръстен.

Сред клетките на повърхностния слой се разграничават тъмни и светли клетки. Повишената отражателна способност на епителните клетки показва намаляване на скоростта на метаболизма им и започваща десквамация.

Боумановата мембрана е прозрачна структура, която не отразява светлината, така че обикновено е невъзможно да се визуализира с конфокална микроскопия.

Суббазалният нервен плексус се намира под мембраната на Боуман. Обикновено нервните влакна изглеждат като ярки ивици, разположени успоредно на тъмен фон, докосвайки се помежду си. Отражателната способност (рефлективност) може да бъде неравномерна по дължината на влакното.

Стромата на роговицата заема 80 до 90% от дебелината на роговицата и се състои от клетъчни и извънклетъчни компоненти. Основните клетъчни елементи на стромата са кератоцитите; те съставляват приблизително 5% от обема.

Типична микроскопска картина на стромата включва няколко ярки неправилни овални тела (кератоцитни ядра), които се намират в дебелината на прозрачна тъмносива или черна матрица. Обикновено визуализацията на извънклетъчните структури е невъзможна поради тяхната прозрачност. Стромата може условно да бъде разделена на подслоеве: преден (разположен директно под мембраната на Боуман и съставлява 10% от дебелината на стромата), предно-среден, среден и заден.

Средната плътност на кератоцитите е по-висока в предната строма, като постепенно намалява към задните слоеве. Плътността на предните стромални клетки е почти два пъти по-висока от тази на задните стромални клетки (ако плътността на предните стромални клетки се вземе за 100%, тогава плътността на задните стромални клетки ще бъде около 53,7%). В предната строма ядрата на кератоцитите имат заоблена форма на боб, докато в задната строма те са овални и по-удължени.

Ядрото на кератоцитите може да варира по яркост. Различната способност за отразяване на светлината зависи от метаболитното им състояние. По-ярките клетки се считат за активирани кератоцити („стрес“ клетки), чиято активност е насочена към поддържане на вътрешната хомеостаза на роговицата. В норма и зрително поле се откриват единични активирани клетки.

Нервните влакна в предната строма на роговицата се визуализират като ярки хомогенни ленти, често образуващи бифуркации.

Десцеметовата мембрана обикновено е прозрачна и не се визуализира чрез конфокална микроскопия.

Задният епител е монослой от шестоъгълни или многоъгълни плоски клетки с равномерно светла повърхност на фона на ясни тъмни междуклетъчни граници.

Устройството има възможност за ръчно или автоматично изчисляване на плътността на клетките, тяхната площ и коефициент на вариабилност.

Патологични промени в структурата на роговицата

Кератоконусът се характеризира със значителни промени в предния епител и стромата на роговицата.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]