Вирус на хепатит А

Вирусният хепатит А е човешко инфекциозно заболяване, характеризиращо се с преобладаващо чернодробно увреждане и проявява клинична интоксикация и жълтеница. Вирусът на хепатит А е бил открит през 1973 г. От С. Фейнстоун (и други), използвайки метода на имунната електронна микроскопия и чрез заразяване с маймуни - шимпанзета и мармозети. Метод имунната електронна микроскопия е, че изпражненията към филтрата се прибавя хепатит А пациент специфично антитяло (възстановяващ серум) и утайката се подлага на електронна микроскопия. Поради взаимодействието на вирусите със специфични антитела, те се подлагат на специфична агрегация. В този случай те са по-лесни за откриване и агрегацията под влиянието на антитела потвърждава специфичността на патогена. Откриването на С. Фейнстоун е потвърдено при експерименти с доброволци.

Вирусът на хепатит А има сферична форма, диаметърът на вириона е 27 nm. Геномът е представен от едноверижна положителна РНК с маса от 2.6 MD. Суперкарпсид отсъства. Типът симетрия е кубичен - икозаедър. Капсидът има 32 капсомера, образува се от четири полипептида (VP1-VP4). Чрез свойствата си вирусът на хепатит А принадлежи към рода Heparnovirus, семейство Picornaviridae. Антигенно, вирусът на хепатит А (HAV - вирус на хепатит А) е хомогенен. HAV се умножава добре в тялото на шимпанзетата, бабуините, хамадрилите и маймуните (хапчетата). От дълго време вирусът не може да се култивира. Едва през 80-те години. Възможно е да се получат клетъчни култури, в които се разпространява HAV. Първоначално се използват за тези цели, обезсмъртена ембрионална бъбречна клетъчна линия макак резус (култура FRhK-4), а сега - трансплантиран бъбрек клетъчна линия от зелена маймуна (Култура 4647).

Според препоръките на експерти, които, приета следната номенклатура на вируса на хепатит А маркери: вируса на хепатит А - Нау антитела срещу вируса на хепатит А в: анти-HAV IgM и анти-HAV IgG.

HAV са малки частици с диаметър 27-30 nm, имащи икозахедрална симетрия и притежаващи хомогенност. На електронен дифракционен образец, получен по метода на имуно агрегация, се откриват електронно-плътни частици с повърхностно разположени симетрично разположени капсомери. При негативно контрастиране в препаратите се откриват пълни и празни частици. Nucleocapsid NAV, за разлика от инфлуенцата, няма повърхностни изпъкналости и мембрани. Важно е също така, че вирусът HAV няма сърцевидна структура.

Според неговите физико-химични свойства на вируса на хепатит А е свързан с фамилията на Picornaviridae, род ентеровируси с атомен номер 72. Въпреки това, тази таксономия е твърде необичайно, и които са намерили възможност да напусне терминология "вируса на хепатит А".

Както всички вируси от семейство Picornaviridae, вирусът на хепатит А съдържа рибонуклеинова киселина. Някои лаборатории показаха възможността за клониране на генома на вируса на хепатит А, което отваря перспективата за получаване на ваксинални препарати.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Устойчивост на вируса на хепатит А

Вирусът е сравнително устойчив на високи температури, киселини, мастни разтворители (липсват липиди), дезинфектанти, толерира ниско температурен кладенец. Всичко това допринася за дългосрочното му съхранение във външната среда. При стайна температура той преживява няколко седмици, при 60 ° С частично губи инфекциозност след 4-12 часа, напълно - след няколко минути при 85 ° С. Изключително устойчив на хлор, благодарение на който е в състояние да проникне в чешмяната вода през преградите на пречиствателните станции за вода.

Обобщавайки всички данни, можем да характеризираме вируса на хепатит А, както следва:

• естественият господар е човек;
• експериментални животни - marmozet, шимпанзе;
• източник на инфекция - изпражнения;
• болест - епидемична и ендемична;
• предавателният път е фекално-орален;
• инкубационен период - 14-40 дни;
• преход към хроничен хепатит - не е отбелязано.

Имунологичните свойства на NAV са, както следва:

• Прототипни щамове - Ms-1, CR-326, GVG. Всички са имунологично сходни или идентични;
• Антителата - IgM и IgG, се произвеждат в отговор на въвеждането на структурни протеини на вируса и са защитни;
• Трофичното действие на човешки серум y-глобулин - предпазва или отслабва заболяването при условие на приложение преди инфекцията или по време на инкубационния период.

Физикохимичните характеристики на NAU са както следва:

• Морфологията е сферична частица без обвивка с кубична симетрия, капсидът се състои от 32 капсомера;
• Диаметърът е 27-30 nm;
• SsS1 Плътност (г / см3) - 1,38-1,46 (отворени частици), 1,33-1,34 (зрели вирион), 1.29-1.31 (незрели вириони, празни частици);
• Коефициентът на утаяване е 156-160 зрели вириони;
• Нуклеинова киселина - едноверижна линейна РНК;
• Относително молекулно тегло - 2,25 106-2,8 106KD;
• Броят на нуклеотидите е 6,500-8,100.

Стабилността на NAV във физикохимичните ефекти е, както следва:

• Хлороформ, етер - е стабилен;
• Хлор, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - частично инактивиране;
• Хлорамин, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - пълно инактивиране;
• Формалин, 1: 4000, 35-37 ° С, 72 часа - пълно инактивиране, 1: 350, 20 ° С, 60 минути - частично инактивиране.

Температура:

• 20-70 °С - стабилен;
• 56 ° С, 30 минути - стабилно;
• 60 ° С, 12 часа - частично инактивиране;
• 85 ° С, 1 мин - пълно инактивиране;
• Автоклавиране, 120 ° С. 20 минути - пълно инактивиране;
• Суха топлина, 180 ° C, 1h - пълно инактивиране;
• UV, 1,1 W, 1 мин. - пълно инактивиране.

Представените данни показват, че физикохимичните свойства на вируса на хепатит А са най-близо до ентеровирусите. Подобно на други ентеровируси, HAV е резистентен на много дезинфекционни разтвори, напълно инактивирани в продължение на няколко минути при 85 ° С и автоклавирани.

Това доказва, че вируса на хепатит А може да се възпроизвежда в първични и непрекъснати монослойни култури от човешки клетъчни линии, и маймуна. Особено активно размножаване на вируса на хепатит А в ин витро култури се наблюдава, когато се използва като изходен материал екстракти пациенти с чернодробна маймуни. Въпреки това, следва да се отбележи, че във всички експерименти съгласно репродукция на вируса на хепатит А в ин витро култури отбележи дълъг инкубационен период в първични пасажи (-10 до 4 седмици), след натрупване на вирусни генетичен материал се увеличава, но абсолютните стойности са много непълнолетен, който поражда много изследователи говорят за непълен репликацията на вируса на хепатит А в тъканни култури.

Обобщавайки литературните данни за възпроизвеждането на вируса на хепатит А от не-коренни култури, може да се каже, че фактът на продължително преживяване на HAV in vitro е безспорен. Оптималните условия за стабилно високо ниво на вирусна репликация не са окончателно идентифицирани и това ограничава изучаването на неговите биологични свойства, производството на източник на реагенти за производството на диагностика и проектирането на ваксини.

В същото време по-оптимистични преценки за този проблем могат да бъдат намерени в литературата. Решаването на всички въпроси, свързани с отглеждането на вируса на хепатит А, е въпрос на близко бъдеще. При изучаване на оптимални условия HAV размножаване в клетъчна култура маймуни резус ембрионални бъбречни разкрити две фази: фаза на инфекциозен вирус производство (до 6-8 дни в петия пасаж) и фазата на интензивно натрупване на вирусен антиген. Също така е показано, че най-значителното натрупване на вирусния антиген настъпва при условията на така нареченото култивиране на ролки (въртящи се бутилки). По този начин се откриват широки възможности за получаване на културен антиген в големи количества и следователно ще се появи изходен материал за приготвяне на диагностични системи и за производство на ваксинални препарати.

Епидемиология на хепатит А

Вирусът на хепатит А има висока патогенност за хората. Според заключението на СЗО (1987), за възникването на болестта, достатъчно е да се зарази само един вирион. Въпреки това практическата инфекциозна доза вероятно е много по-висока. Източникът на инфекция е само заразен човек. Вирусът се освобождава в големи количества с изпражнения 12-14 дни преди появата на жълтеница и в рамките на 3 седмици. Иктеричен период. Не са установени значителни различия в изолацията на патогена при пациенти с иктерични, жълтеница и асимптоматични форми на хепатит А. Методът на инфекция е фекално-орален, предимно воден, а също и от домакински и хранителни пътища. Методът на инфекция е фекално-орален, предимно воден, а също и от домакински и хранителни пътища. Основният (първичен) път на предаване на вируса е водата. Възможно е също така да се зарази с въздух. Податливостта на населението е универсална. Повечето деца на възраст под 14 години са болни. Болестта има подчертано есенно-зимен сезонност.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Симптомите на хепатит А

Инкубационният период варира от 15 до 50 дни, което зависи от количеството на инфектиращата доза на вируса, но средно е 28-30 дни. След като в тялото, хепатит А вирус се реплицира в регионалните лимфни възли, в кръвта и след това към чернодробни клетки и причинява дифузно остър хепатит, който е придружен от лезии на чернодробните хепатоцити и ретикулоендотелната клетки и намаляване на неговите детоксикация и бариерни функции. Увреждането на хепатоцитите не се дължи на прякото действие на вируса, а в резултат на имунопатологичните механизми. Най-типичният картина на хепатит А е остра иктеричен циклична форма: инкубационния период на продромални (preicteric), жълтеница и възстановяването период. Въпреки това, в огнища на инфекция разкрива голям брой пациенти с асимптоматични и anicteric форми на инфекция, броят на които преобладава над иктеричен ( "айсберг явление").

Пост-инфекциозният имунитет е силен и продължителен, причинен от вирусни неутрализиращи антитела и клетки на имунната памет.

Микробиологична диагноза на хепатит А

Диагностика на хепатит А (с изключение на инфекция животни - шимпанзета marmozet, бабуини, които сме) на базата на различни имунологични методи: Метод DGC имунофлуоресценция, хемаглутинацията имунната адхезия (комплекс на вирусен антиген + антитяло в присъствието на комплемент адсорбира върху еритроцити и предизвиква тяхната адхезия) , Въпреки това, прилагането на тези методи е ограничен поради липсата на специфични вирусни антигени и реакционната имунофлуоресценция изисква чернодробни биопсии, което е нежелателно. Надежден и специфичен метод е имунизиран електронна микроскопия, но това отнема много време. Следователно, докато само приемлив метод за имунологична реакция е имуносорбентен анализ твърда фаза под формата на IPM, или RIM, особено в модификацията на "улавяне" на имуноглобулин М. В нашата страна за тази цел, предложен тестова система - "DIAG-A-GEO". Работният принцип на тази система за изпитване е както следва. По стените на полистирол lunochek сорбират първите антитела към имуноглобулини от клас М (antiimmunoglobuliny М) след това се добавя към изследван серума на пациента. Ако има клас антитяло IgM, те ще се свърже с антитяло-Ti-M, след това се прибавя към конкретен вирусен антиген (вирус на хепатит А), която се получава чрез култивиране на клетъчна култура. Системата се промива и към нея се прибавят антивирусни антитела белязани с пероксидаза от хрян. Ако взаимодействат всичките четири компонента на системата, възниква четирислоен "сандвич":

• антиимуноглобулини М,
• имуноглобулини М (срещу вируса на хепатит А - в тестовия серум на пациента),
• вирусен антиген,
• антивирусни антитела, белязани с ензим.

За да се открие този комплекс, субстрата за ензима се добавя към лунетите. Под въздействието на ензима той се разрушава и се образува оцветен продукт. Интензитетът на цвета може да бъде измерен количествено с помощта на спектрофотометър или фотоколориметър.

Предимството на метода за "улавяне" на IgM е, че антителата от този клас имуноглобулини се появяват при първичния имунен отговор и показват активен стадий на инфекция, те изчезват след прехвърлената болест. Антивирусните антитела, принадлежащи към класа на IgG, за разлика от тях, продължават да съществуват дълго време след заболяването, като осигуряват придобития имунитет. За откриването на вируса на хепатит А е предложен метод за ДНК сонда: като ДНК сонда се използва допълнителна vRNA.

Лечение на хепатит А

Поради факта, че продукцията на интерферон се нарушава при вирусен хепатит, лечението на хепатит А се основава на употребата на интерферон и индуктор на неговия ендогенен синтез на амиксин.

Специфична профилактика на хепатит А

Преди прилага широко seroprevention хепатит А с използване на гамаглобулин не е оправдано, обаче, акцентът се поставя в стопанството имунизация, извършена ваксинация срещу хепатит А. За тази цел се разработват и вече се използват различни варианти на ваксини. В Русия една ефективна ваксина срещу хепатит А беше получена през 1995 г. И сега тя се прилага успешно.