Медицински експерт на статията
Нови публикации
PCR като метод за диагностициране на генетични заболявания
Последно прегледани: 23.04.2024
Цялото съдържание на iLive е медицински прегледано или е проверено, за да се гарантира възможно най-голяма точност.
Имаме строги насоки за снабдяване и само свързваме реномирани медийни сайтове, академични изследователски институции и, когато е възможно, медицински проучвания, които се разглеждат от специалисти. Имайте предвид, че номерата в скоби ([1], [2] и т.н.) са линкове към тези проучвания.
Ако смятате, че някое от съдържанието ни е неточно, остаряло или под съмнение, моля, изберете го и натиснете Ctrl + Enter.
PCR е ново постижение в молекулярната генетика, използвано за ДНК амплификация и позволява специфичната част от ДНК (т.е. Всеки интересен ген) да бъде бързо реплицирана in vitro повече от 200 000 пъти. За да се извърши реакцията, е достатъчно да има ДНК материал от една клетка; количеството ДНК, амплифицирано чрез PCR, е толкова голямо, че тази ДНК може просто да бъде оцветена (използвайки радиоактивни сонди, след като не се изисква електрофореза). Предпоставка за провеждане на PCR е познаването на нуклеотидната последователност на амплифицираната ДНК област за правилна селекция на изкуствено синтезирани праймери.
Понастоящем PCR е процес, който се случва в една епруветка и се състои от повтарящи се цикли на амплифициране (възпроизвеждане, копиране) на специфични ДНК последователности, за да се получи достатъчно голям брой копия, които могат да бъдат идентифицирани чрез електрофореза. Един ключов компонент на реакцията - "праймери" - синтетични олигонуклеотиди, състоящи се от 20-30 бази комплементарни "сайтове" (площи) отвръщане (свързване) на идентифицираща част на ДНК шаблон.
PCR протича автоматично в програмируем термостат - термоциклер (термоциклер). Трикратният цикъл, който води до копия на идентифицируемата част от шаблона ДНК, се повтаря 30 до 50 пъти в съответствие с предварително зададената програма на термичния циклер. В първия цикъл олигопрамите хибридизират с оригиналната шаблонна ДНК и след това (в следващите цикли) и с новите синтезирани ДНК молекули, които се натрупват в реакционната смес. В последния случай, ДНК синтез не приключва поради температурни промени, и при достигане на граничната област амплифицира ДНК полимераза, която определя размера на ново-синтезираната ДНК региона, в рамките на един нуклеотид.
Като метод за откриване на получените ДНК молекули се използва електрофореза, чрез която амплифицираният материал се разделя в зависимост от размера на ампликоните (продуктите на амплификация).
С помощта на PCR е възможно директно да се изследват местата на локализиране на предполагаеми мутации или полиморфни места, както и да се изследва наличието на други специфични характеристики на ДНК.
[