Имунофенотипизиране на хемообластози

Значителен напредък в хематологични изследвания, свързани през последните години с използването на съвременни имунологични методи и автоматизирани инструменти за анализ и сортиране на клетки на периферната кръв и костен мозък - поточни цитометри. Традиционна морфологичен и цитохимични изследване на болестта на субстрата клетки (кръвта, червен костен мозък, лимфни възли, далак, и т.н.), в много случаи, особено в лимфопролиферативни заболявания, не разкриват цялото разнообразие от възможности сред морфологично подобни форми и идентифициране на произхода на патологична клон , Тези проблеми могат да бъдат решени само чрез изследване на имунологичните характеристики на клетките. Всеки етап на диференциация на хемопоетични клетки има свой собствен набор от антигени, които са по международната класификация, известен като диференциация и диференциация са разделени на клъстери, определен CD.

В блок диференциация на неопластични промени могат да се появят на всеки етап от нормалното развитие на клетките, в резултат на патологично клетъчен клонинг определяне субстрат заболяване и със същия имунологичен (или фенотипна) характеристика. След проучване на тези маркери в клетки може да се определи от всяка форма или изпълнение на заболяването са последователно, т.е. На базата на имунологична клетъчен фенотип диференциална диагноза, която е най-трудно в лимфопролиферативни нарушения, тъй като основният клетъчен субстрат патологични заболявания са почти същия тип клетки морфологично.

Фенотипирането позволява използване на моноклонални антитела типизирани бластна клетки и зрели миелоидни кръв, моно-, лимфоцитна серия в присъствието на диференциация антигени (рецептори) в стената на клетката. В раздела "Оценка на имунния статус на организма" са описани частично характеристиките и диагностичната значимост на клетъчните маркери; По-долу е дадено кратко описание на антигенните клетъчни маркери, приложени при диагностицирането на хемобаластозата. На мембраните на кръвните клетки и червения костен мозък могат да бъдат идентифицирани следните антигени (маркери).

• CD2 е мономерен трансмембранен гликопротеин. Той присъства на повърхността на всички циркулиращи Т-лимфоцити и някои NK-лимфоцити. CD2 участва в процеса на алтернативно активиране на Т-лимфоцитите. Откриването на CD2 с помощта на моноклонални антитела в клиничната практика се използва за фенотипизиране на остри Т-клетъчни левкемии, лимфоми, хронични възпалителни и имунодефицитни състояния.
• CD3 - протеинов комплекс, свързан с антиген-специфичен Т-клетъчен рецептор, е главният функционален маркер на Т-лимфоцитите. Улеснява предаването на сигнала за активиране от мембраната в цитоплазмата на клетката. CD3 откриването е показано за диагностициране на остра Т-клетъчна левкемия, лимфома (CD3 не се експресира в не-Т-клетъчни лимфоидни тумори) и имунодефицитни заболявания.
• CD4 - трансмембранен гликопротеин, изразено от една подгрупа на Т помощник (бобини), представляваща 45% от периферни кръвни лимфоцити. В ранните стадии на развитие на лимфоцити в тимуса, CD4 антигени, както и CD8, се експресират от всички кортикални лимфоцити. Медуларен тимоцити, което е подобно на фенотипа на зрелия CD4 + периферни кръвни Т-клетки (хелперни Т-клетки), или вече експресират CD4 или CD8 рецептори. В периферната кръв до 5% от клетките са едновременно белязани с CD4 и CD8. Леко изразяване на CD4 е възможно при някои моноцитни клетки. CD4 се експресира в повечето случаи, Т-клетъчен лимфом, включително фунгоидна микоза, и HTLV-свързана Т клетъчна левкемия (HTLV - човешки Т-лимфотропен вирус - човешки Т-лимфотропен вирус).
• CD5 - гликопротеин с една верига, присъстващ върху всички зрели Т-лимфоцити и повечето тимоцити, слабо се експресира от В-лимфоцити. CD5 се открива върху неопластични клетки на В-клетъчна хронична лимфоцитна левкемия и центроцитен лимфом. При други видове злокачествени лимфоидни заболявания - фоликуларен лимфом, косматоклетъчна левкемия, голям клетъчен лимфом - CD5 не се експресира.
• CD7 е едноверижен протеин, най-ранният маркер на Т-клетъчната диференциация. Той се експресира от про-Т-лимфоцитите, дори преди да мигрират към тимуса. CD7 се открива върху повечето NK клетки, слаба експресия се отбелязва върху моноцитите. В-лимфоцитите и гранулоцитите не съдържат този антиген. Дефиницията на CD7 се използва за диагностициране на лимфоми, детска Т-клетъчна лимфобластна левкемия.
• CD8 е протеин, състоящ се от две полипептидни вериги, свързани чрез дисулфидни мостове. Той се експресира чрез субпопулация на цитотоксични и супресорни Т лимфоцити, които съдържат 20-35% от периферните кръвни лимфоцити. Този антиген също има NK лимфоцити, кортикални тимоцити, 30% медуларни тимоцити и субпопулация на клетки от червен костен мозък. CD8 се изследва за количествена оценка на съдържанието на Т-супресор (вижте раздел "Т-лимфоцити-супресори в кръвта" по-горе).

• CD10 е ендопептидазата, свързана с клетъчната мембрана. CD10 експресира млади форми на В лимфоцити и субпопулация на кортикални лимфоцити. CD10 експресира всички клетки на ALL.
• CD11c експресират макрофаги, моноцити, гранулоцити, NK клетки и клетки на космат-клетъчна левкемия върху клетъчната мембрана.
• CD 13 - гликопротеин изразено от клетки на миеломоноцитна серия (прогениторни клетки, неутрофили, базофили, еозинофили, моноцити и клетки на миелоидна левкемия). Липсва в Т и В лимфоцити, еритроцити и тромбоцити.
• CD14 е гликопротеин на повърхностната мембрана. Изразява се главно от моноцити и макрофаги. CD14 се открива в повече от 95% моноцити от периферна кръв и костен мозък. Силна експресия на CD14 се наблюдава при остра миелобластна левкемия. При остра и хронична лимфобластна левкемия този антиген не се експресира.
• CD15 е олигозахарид. Участва в процесите на фагоцитоза и хемотаксис. Този антиген присъства на повърхността на зрели гранулоцити и клетки на Березовски-Стърнберг. Експресията на CD15 антиген се открива при болестта на Ходжкин. При неходжкинов лимфом CD15 не се открива в повечето случаи.
• CD16 се експресира на повърхността на гранулоцити, моноцити, макрофаги и NK клетки. Всички лимфоцити, експресиращи този антиген, имат способността за антитяло-зависима клетъчна цитотоксичност. CD16 се определя, когато се въвеждат хронични миелоцитни левкемии, за да се характеризират NK клетките.
• CD19 е гликопротеин, присъстващ на всички периферни B лимфоцити, както и на всички В-клетъчни прекурсори. Отсъства в плазмените клетки. Това е най-ранният маркер на В-клетките, играе важна роля в регулирането на активирането и пролиферацията на В-лимфоцитите. CD19 се експресира върху всички неопластични клетки на остра левкемия с В-клетъчен произход и присъства и при някои форми на остра монобластна левкемия.
• CD20 е негликозилиран протеин. При онтогенезата на В-лимфоцитите, антигенът на CD20 се появява след CD19 в стадия на диференциация на лимфоцитите преди В-клетките. Отсъства на плазмената мембрана на плазмените клетки. Той се експресира в ALL, В-клетъчна хронична лимфоцитна левкемия, косматоклетъчна левкемия, лимфома на Бъркит и много рядко при остра монобластна левкемия.
• CD21 е гликопротеин, в значително количество присъства на В-лимфоцити в лимфоидни органи и в малко количество върху В-клетки на периферна кръв. CD21 е рецептор за вируса на Epstein-Barr.
• CD22 е протеин, състоящ се от две полипептидни вериги. Той се експресира на мембраната на повечето В-лимфоцити, включително прогениторни клетки (пролимфоцити). Антигенът не се експресира върху В-лимфоцити (плазмени клетки) след тяхното активиране. Най-изразната експресия на CD22 се открива при клетки с косматоклетъчна левкемия, слаба - при миелоидни левкемии и не-Т-клетъчни ALL.
• CD23 е гликопротеин, експресиран от активирани В-лимфоцити на периферна кръв в много по-голяма степен. CD23 медиира IgE-зависима цитотоксичност и фагоцитоза от макрофаги и еозинофили.
• CD25 е моно-верижен гликопротеин, идентифициран като нисък афинитетен рецептор за IL-2. Този рецептор се експресира върху активирани Т-лимфоцити и при по-ниска плътност върху активирани В-клетки. В периферната кръв на здрави хора, антигенът присъства в повече от 5% от лимфоидните клетки.
• CD29 е фибронектинов рецептор. Тя се разпространява широко в тъканите, изразява се в левкоцити. CD29 откриване върху периферни кръвни клетки се използва за типизиране на субпопулация на Т клетки, притежаващи CD4 + CD29 + фенотип, които се наричат тип 2 помощник (Th2). Тези клетки, чрез производството на лимфокини, участват в реализацията на хуморалния имунен отговор.
• CD33 е трансмембранен гликопротеин. Той се намира на повърхността на клетките от миелоидната и моноцитната серия. Намира се на повърхността на моноцити и, в по-малка степен, на гранулоцити от периферна кръв. Приблизително 30% от клетките на червения костен мозък експресират CD33, включително миелобласти, промиелоцити и миелоцити. Отсъства антиген на мембрани на плурипотентни стволови клетки. CD33 се използва за характеризиране на клетки при миелоидни левкемии. Клетките от левкемия с лимфоиден и еритроиден произход не експресират CD33.
• CD34 е фосфогликопротеин, експресиран от хематопоетични прогениторни клетки, включително монопотентни стволови клетки. Най-изразната експресия на Ар се наблюдава в ранните предшественици; когато клетките зреят, изразът на маркера пада. CD34 също се открива върху ендотелните клетки. CD34 се използва за характеризиране на клетки в остра миелогенна и лимфобластна левкемия. При хронична лимфоцитна левкемия и лимфоми не се открива експресия на CD34 антиген.

• CD41a се изразява чрез тромбоцити и мегакариоцити. Моноклоналните антитела за откриване на CD41a се използват за диагностициране на мегакариообластна левкемия. При Glazmann тромбастения експресията на този антиген отсъства или се потиска значително.
• CD42b е мембранен гликопротеин, състоящ се от две полипептидни вериги. Маркерът се намира на повърхността на тромбоцитите и мегакариоцитите. В клиничната практика детектирането на CD42b се използва за диагностициране на тромбоцитопатия - синдром на Бернар-Сълие.
• CD45RA принадлежи към класа на трансмембранните гликопротеини. Това е общ левкоцитен антиген. Той се експресира върху клетъчната мембрана на В-лимфоцитите, в по-малка степен Т-лимфоцити и на зрелите медуларни тимоцити. Маркерът не се експресира чрез гранулоцити.
• CD45RO е изоформа с ниска молекулна маса на CD45RA - общ левкоцит Ag. Те се намират върху Т-клетки (Т-лимфоцити от паметта), субпопулации на В-лимфоцити, моноцити и макрофаги. Моноклоналните антитела към CD45RO взаимодействат с повечето тимоцити - субпопулации на остатъчни CD4 + и CD8 + Т-лимфоцити и зрели активирани Т-клетки. Клетки от миеломоноцитен произход, гранулоцити и моноцити също носят този антиген. Той се открива в центробластични и имунобластични лимфоми.
• CD46-О-гликозилиран димер. Той е широко разпространен в тъканите и изрази Т- и В-лимфоцити, моноцити, гранулоцити, NK-клетки, тромбоцити, ендотелиални клетки, фибробласти, но отсъства върху повърхността на еритроцити. CD46 осигурява тъканна защита от действие на комплемента.
• CD61 е тромбоцитен антиген. Той се експресира върху тромбоцити от периферна кръв и червен костен мозък, както и от мегакариоцити и мегакариобаласти. Неговата дефиниция се използва като маркер за остра мегакариообластна левкемия. Експресията на антигена липсва или се потиска при пациенти с Glanzmann тромбастения.
• CD95, наречен също така Fas или APO-1, е трансмембранен гликопротеин, член на семейството на рецепторите на тумор некрозисфактора. Той се експресира в значителни количества върху Т-лимфоцити от периферна кръв (CD4 + и CD8 +) и в по-малка степен върху В-лимфоцити и NK клетки. Този антиген се експресира и върху гранулоцити, моноцити, тъканни клетки и неопластични клетки. Свързването на CD95 към Fas лиганда (CD95L) индуцира апоптоза в клетките.
• CD95L или Fas лиганд, мембранен протеин, принадлежащ към семейството на рецептори на тумор некрозисфактор. Този антиген се експресира от цитотоксични Т лимфоцити, NK клетки и много често от туморни клетки; основният индуктор на апоптозата в клетките.
• HLA-DR е мономорфна детерминанта на молекулите от клас II на главния човешки комплекс за хистосъвместимост (HLA). Маркер се експресира върху Лангерхансови клетки, дендритни клетки от лимфоидни органи, както и някои видове макрофаги, В лимфоцити, активирани Т клетки и тимуса епителни клетки. Тестът за този маркер се използва за количествено определяне на активираните Т-лимфоцити с фенотипа CD3 + HLA-DR +.

Като се използва различна селекция от моноклонални антитела към маркери, е възможно да се направи фенотипен портрет на клетки, характерни за дадена форма на левкемия.

Освен използването на техники Имунофенотипизиране за диагностика и диференциална диагностика на хематологични злокачествени заболявания, особено важно обърна използването им в процеса на лечението да се направи оценка на състоянието на ремисия и остатъчна популация от левкемични клетки. Познаването на фенотипните "портрета" на бластни клетки в периода на диагностика, за да тези маркери, които открие клетъчна левкимия клонинг в ремисия, както и от увеличаването на броя им - да се предскаже развитието на рецидив дълго (за 1-4 месеца), докато неговите клинични и морфологични черти.

[1], [2], [3], [4],