Медицински експерт на статията
Нови публикации
Анализ на дължината на полиморфизма на рестрикционните фрагменти
Последно прегледани: 05.07.2025
Цялото съдържание на iLive е медицински прегледано или е проверено, за да се гарантира възможно най-голяма точност.
Имаме строги насоки за снабдяване и само свързваме реномирани медийни сайтове, академични изследователски институции и, когато е възможно, медицински проучвания, които се разглеждат от специалисти. Имайте предвид, че номерата в скоби ([1], [2] и т.н.) са линкове към тези проучвания.
Ако смятате, че някое от съдържанието ни е неточно, остаряло или под съмнение, моля, изберете го и натиснете Ctrl + Enter.
Широко разпространеното използване на различни рестрикционни ендонуклеази за анализ на хромозомна ДНК разкри огромната вариабилност на човешкия геном. Дори малки промени в кодиращите и регулаторните области на структурните гени могат да доведат до спиране на синтеза на определен протеин или до загуба на неговата функция в човешкото тяло, което обикновено се отразява на фенотипа на пациента. Въпреки това, приблизително 90% от човешкия геном се състои от некодиращи последователности, които са по-вариабилни и съдържат много така наречени неутрални мутации или полиморфизми и нямат фенотипна експресия. Такива полиморфни области (локуси) се използват в диагностиката на наследствени заболявания като генетични маркери. Полиморфните локуси присъстват във всички хромозоми и са свързани със специфичен регион на гена. Чрез определяне на локализацията на полиморфен локус е възможно да се установи кой ген е свързан с мутацията, причинила заболяването при пациента.
За изолиране на полиморфни ДНК региони се използват бактериални ензими - рестриктази, чийто продукт са рестрикционни сайтове. Спонтанните мутации, които се случват в полиморфните сайтове, ги правят резистентни или, обратно, чувствителни към действието на специфична рестриктаза.
Мутационната вариабилност в рестрикционните сайтове може да бъде открита чрез промяна на дължината на рестрикционните фрагменти на ДНК чрез разделянето им с помощта на електрофореза и последваща хибридизация със специфични ДНК сонди. При липса на рестрикция в полиморфен сайт, на електрофореграмите ще бъде открит един голям фрагмент, а при наличие на такъв - по-малък фрагмент. Наличието или отсъствието на рестрикционен сайт в идентични локуси на хомоложни хромозоми позволява сравнително надеждно маркиране на мутантния и нормалния ген и проследяване на предаването му на потомството. По този начин, при изследване на ДНК на пациенти, в двете хромозоми на които има рестрикционен сайт в полиморфен регион, на електрофореграмата ще бъдат открити къси ДНК фрагменти. При пациенти, хомозиготни за мутация, която променя полиморфния рестрикционен сайт, ще бъдат открити по-дълги фрагменти, а при хетерозиготни пациенти - къси и дълги фрагменти.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]