Медицински експерт на статията
Нови публикации
Анализ на полиморфизма на дължината на ограничаващия фрагмент
Последно прегледани: 23.04.2024
Цялото съдържание на iLive е медицински прегледано или е проверено, за да се гарантира възможно най-голяма точност.
Имаме строги насоки за снабдяване и само свързваме реномирани медийни сайтове, академични изследователски институции и, когато е възможно, медицински проучвания, които се разглеждат от специалисти. Имайте предвид, че номерата в скоби ([1], [2] и т.н.) са линкове към тези проучвания.
Ако смятате, че някое от съдържанието ни е неточно, остаряло или под съмнение, моля, изберете го и натиснете Ctrl + Enter.
Широкото използване на различни рестрикционни ендонуклеази за анализ на хромозомна ДНК разкри огромна вариабилност в човешкия геном. Дори малки промени в кодиращите и регулаторните области на структурните гени могат да доведат до прекратяване на синтеза на определен протеин или до загубата на неговата функция в човешкото тяло, което обикновено засяга фенотипа на пациента. Обаче приблизително 90% от човешкия геном се състои от некодиращи секвенции, които са по-променливи и съдържат много т.нар неутрални мутации или полиморфизми и нямат фенотипна експресия. Такива полиморфни места (локуси) се използват при диагностицирането на наследствени заболявания като генетични маркери. Полиморфни локуси присъстват във всички хромозоми и са свързани със специфична област на гена. След като се определи локализацията на полиморфния локус, е възможно да се установи с кой геном е свързана мутация, която причинява заболяването в пациента.
За да се изолират полиморфните участъци на ДНК, се използват бактериални ензими - рестрикционни ензими, чийто продукт са рестрикционни сайтове. Спонтанните мутации, които се срещат в полиморфните места, ги правят устойчиви или обратно чувствителни към действието на специфичен рестрикционен ензим.
Мутационната вариабилност в рестрикционните места може да бъде открита чрез промяна на дължината на ограничените ДНК фрагменти, като се отделят чрез електрофореза и последваща хибридизация със специфични ДНК сонди. В отсъствието на ограничение в полиморфното място, един голям фрагмент ще бъде открит на електрофореграмите, и ако присъства, ще бъде наличен по-малък фрагмент. Наличието или липсата на рестрикционно място в идентични локуси на хомоложни хромозоми прави възможно надеждното маркиране на мутантния и нормалния ген и проследяване на предаването му на потомството. По този начин, в изследването на ДНК на пациенти, и в двете хромозоми, от които рестрикционното място присъства в полиморфната област, кратки фрагменти от ДНК ще бъдат разкрити на електрофореграмата. При пациенти хомозиготни за мутация, която модифицира полиморфно рестрикционно място, ще бъдат открити фрагменти с по-голяма дължина и в хетерозиготни фрагменти ще бъдат идентифицирани къси и дълги фрагменти.
[