Витамин А в кръвта

Референтни стойности (норма) за концентрацията на витамин А (ретинол) в кръвния серум: при деца на възраст 1-6 години - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 години - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 години - 0,91-2,51 μmol/l; при възрастни - 1,05-2,09 μmol/l.

Витамин А е мастноразтворим витамин и съществува в две форми: самият витамин А или ретинол (намира се само в животински продукти) и провитамин А, известен като каротин (получава се от животински и растителни продукти), който може да се превърне в ретинол в стените на храносмилателния тракт. Приблизително 50-90% от хранителния ретинол се абсорбира в тънките черва и се транспортира в хиломикрон-свързан комплекс до черния дроб, където се съхранява като ретинол палмитат. Когато е необходимо, той се освобождава в кръвния поток като ретинол, комплексиран с витамин А-свързващ протеин. В кръвния серум комплексът витамин А-свързващ протеин + ретинол се свързва с транстиретин. От кръвния серум ретинолът се поема от целевите клетки, като фоторецепторите на ретината и епитела.

Когато тялото получава витамин А в количества, надвишаващи нуждите (180-430 мкг ретинол на ден в зависимост от възрастта, пола и физиологичното състояние), излишъкът му се отлага в черния дроб, образувайки депо от този витамин. Когато приемът на ретинол с храната е намален, запасите му от черния дроб се освобождават в кръвния поток, поддържайки концентрацията на ретинол в кръвния серум на нормално ниво (над 0,7 μmol/l). Други биологично активни форми на витамин А (ретинал и ретиноева киселина) присъстват в кръвта в много ниски концентрации (под 0,35 μmol/l); ретиноловите естери представляват приблизително 5% от общия витамин А (0,1-0,17 μmol/l).

Витамин А играе важна роля в окислително-редукционните процеси. Ретинолът насърчава образуването на гликоген в черния дроб и мускулите, спомага за повишаване на съдържанието на холестерол в кръвта и участва в синтеза на стероидни и полови хормони. Той е необходим за растежа и формирането на скелетната система, ресинтеза на родопсин, а също така насърчава нормалното функциониране на лигавиците и покривния епител на кожата, предотвратявайки нейната метаплазия, хиперкератоза и прекомерно лющене. Витамин А помага за укрепване на косата, зъбите и венците. През последните години е доказана разнообразната роля на витамин А в предотвратяването на рак и регулирането на имунитета (необходим е за завършване на фагоцитозата, увеличава синтеза на Ig, стимулира образуването на Т-килидери, стимулира Т-хелпери тип II и др.). Витамин А е активен антиоксидант, действащ главно в присъствието на витамин Е; той предпазва витамин С от окисляване. Дефицитът на витамин А се счита за рисков фактор за злокачествени новообразувания. Експериментални проучвания показват, че увеличаването на съдържанието на витамин А в диетата увеличава средната продължителност на живота със 17,5%. Цинкът е основен кофактор в метаболизма на витамин А (необходим за синтеза на витамин А-свързващ протеин).

Средната дневна нужда от ретинол за възрастни (20-50 години) е 1,2 mg (4000 IU, 1 IU е еквивалентна на 0,3 мкг ретинол), за бременни жени - 1,5 mg (5000 IU), за кърмещи жени - 1,8 mg (6000 IU), за хора над 60 години - 2,5 mg (10 000 IU). Най-малко една трета от дневната нужда от ретинол трябва да се доставя на организма в готов вид; останалата част може да се покрие чрез консумация на каротеноиди, от които се образува ретинол в организма. Трябва да се има предвид, че приблизително 30% от ретинола в хранителните продукти се разрушава по време на термична обработка. Активността на ретинола е 2 пъти по-висока от тази на каротина, освен това само 30-40% от последния се абсорбира в червата. Следователно, при оценка на диетата се смята, че 1 mg ретинол е приблизително еквивалентен на 6 mg каротеноиди.

Определяне на ретинол (витамин А) и каротеноиди в кръвен серум по метода на Беси, модифициран от Л. А. Анисимова

Принцип на метода

Определянето на витамин А и каротеноиди се основава на тяхната хидролиза в алкален алкохолен разтвор, последвана от екстракция със смес от органични разтворители.

Реагенти

• 11 M разтвор на калиев хидроксид (KOH).
• 96% етилов алкохол.
• 1 M разтвор на калиев хидроксид (KOH) в 96% етилов алкохол: 1 обем от 11 M разтвор на KOH се смесва с 10 обема от 96% етилов алкохол. Реактивът се приготвя в деня на изследването. Ако по време на смесването се появи оцветяване, алкохолът трябва да се пречисти чрез дестилация преди употреба.
• Ксилен, химически чист
• Октан, химически чист
• Ксилен-октанова смес: приготвя се чрез смесване на равни обеми ксилен и октан.

Изследванията се провеждат с помощта на спектрофотометър.

Процесът на определяне на витамин А

Кръв, взета от пръста (около 1 ml), се поставя в центрофужна епруветка и се поставя в стъклена чаша с топла вода (температура 40-45° C) за 20-30 минути. За да се отдели серумът, кръвният съсирек внимателно се изтегля по ръба на стените на епруветката с тънка стъклена пръчка и се центрофугира при 3000 rpm за 10 минути.

0,12 ml серум се събира и прехвърля в аглутинационна епруветка, където след това се добавят 0,12 ml 1 M алкохолен разтвор на калиев хидроксид. Съдържанието се разклаща добре.

Епруветките с пробите се поставят във водна баня за 20 минути при температура 60°C, за да се извърши хидролиза.

Пробите се охлаждат и към тях се добавя 0,12 ml ксилен-октанова смес, след което се разклащат енергично в продължение на 10-15 s. Охлаждат се отново и се центрофугират.

Горният слой, съдържащ витамин А и каротеноиди, се отстранява внимателно с помощта на пастьорова пипета с гумена гумена топка и се прехвърля в микрокювети.

Пробите се спектрофотометрират при дължина на вълната 328 nm за определяне на витамин А и при дължина на вълната 460 nm за определяне на каротеноиди.

След спектрофотометрията пробите се подлагат на ултравиолетово лъчение, за да се разруши витамин А. За тази цел кварцова (бактерицидна) лампа се монтира на разстояние 15-20 см от микрокюветите, така че частта от кюветата, запълнена с течност, да бъде изложена на облъчване; времето за облъчване е 45-60 минути.

Пробите се спектрофотометрират повторно при дължина на вълната 328 nm. Съдържанието на витамин А се определя от разликата в стойностите на екстинкция (оптична плътност), като се взема предвид коефициентът (фактор) 637, изчислен от Беси за витамин А.

Изчислението се извършва по формулата:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Където X е съдържанието на витамин А, μg/dl; 637 е коефициентът, изчислен по Беси за определяне на витамин А; E328(1) е оптичната плътност на разтвора преди облъчване; E328(2) е оптичната плътност на разтвора след облъчване.

Коефициентът за преобразуване на концентрацията на витамин А от µg/dL в µmol/L е 0,035.

Съдържанието на каротеноиди се изчислява по формулата:

X = 480-E480,

Където X е съдържанието на каротеноиди, μg/dl; 480 е коефициентът, изчислен по Беси за определяне на каротеноиди; E480 е оптичната плътност на тествания разтвор.

Забележка

Според Беси, при провеждане на изследвания може да се използва по-голям или по-малък обем серум, но съотношението му към обема на алкохолния разтвор трябва да бъде постоянно при всяка промяна в обема (количеството) на ксилен-октановата смес.

Нормалното съдържание на витамин А в кръвния серум е: при новородени и кърмачета - 160-270 μg/l; при възрастни - 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). Съдържанието на каротеноиди в кръвния серум на възрастните е 800-2300 μg/l.