Витамин А в кръвта

Референтните стойности (норма) на концентрацията на витамин А (ретинол) в кръвния серум: при деца 1-6 години - 0,7-1,5 μmol / l, 7-12 години - 0,91-1,71 μmol / l, 13 -19 години - 0,91-2,51 μmol / l; при възрастни е 1,05-2,09 μmol / l.

Витамин А се отнася до мастноразтворими и съществува в две форми - действителната витамин А или ретинол (само в животински продукти) и провитамин А, известен като каротин (получен от животински или растителен произход), който може да бъде превърнат ретинол в стените храносмилателния тракт. Приблизително 50-90% от ретинол входящо храна се абсорбира в тънките черва и транспортирани в хиломикроните, свързани с комплекса на черния дроб, където той се съхранява под формата на ретинол палмитат. Ако е необходимо, той се освобождава в кръвния поток под формата на ретинол, който е в комбинация с витамин А-свързващ протеин. В серума витамин А-свързващ протеин + ретинолов комплекс се свързва с транстиретин. От серума, ретинолът се улавя от целевите клетки, като ретиналните фоторецептори и епитела.

Когато витамин А навлезе в организма в по-голяма степен от изискванията (180-430 μg ретинол на ден в зависимост от възрастта, пола и физиологичното състояние), излишъкът му се депозира в черния дроб, образувайки депото на този витамин. С намален прием на ретинол от храната, неговите запаси от черния дроб се освобождават в кръвния поток, поддържайки серумната концентрация на ретинол в нормално ниво (над 0,7 μmol / L). Други биологично активни форми на витамин А (ретинал и ретиноева киселина) присъстват в кръвта в много ниски концентрации (под 0,35 μmol / L); върху естери на ретинол се падат приблизително 5% от общия витамин А (0,1-0,1 μmol / l).

Витамин А има важна роля в процесите на окисляване и редукция. Ретинол насърчава образуването на гликоген в черния дроб и мускулите, подобрява кръвния холестерол участва в синтеза на стероидни и полови хормони. Той е необходим за растеж и образуване на кост скелет ресинтез на родопсин и също допринася за нормалното функциониране на лигавиците и епитела на капака на кожата, предотвратяване на неговото метаплазия, хиперкератоза и прекомерно лющене. Витамин А помага за укрепване на косата, зъбите и венците. През последните години, показва разнообразна роля на витамин А в превенцията на рак и регулацията на имунитета (от съществено значение за завършване на фагоцитоза, увеличаване на синтеза на Ig, стимулира производството на Т клетки убийци, стимулира тип Т-хелперни II и др.). Витамин А - активен антиоксидант, който действа главно в присъствието на витамин Е; защитава витамин С от окисляване. Дефицитът на витамин А се счита за рисков фактор за злокачествените новообразувания. В експериментални проучвания е показано, че повишаването на съдържанието на витамин А в диетата увеличава средната продължителност на живота с 17,5%. Цинкът е основен кофактор на метаболизма на витамин А (необходим за синтеза на витамин А-свързващ протеин).

Средната дневна изискването за ретинола възрастни (20-50 години) е 1.2 мг (4,000 IU, 1 IU е еквивалентно на 0,3 микрограма ретинол) за бременни жени - 1.5 мг (5000 IU) за кърмене - 1, 8 mg (6000 IU), за хора над 60 години - 2,5 mg (10 000 IU). Най-малко една трета от дневните нужди от ретинол трябва да се доставят на тялото в готов вид; останалата част може да се абсорбира чрез използването на каротеноиди, от които в тялото се образуват ретинол. Трябва да се има предвид, че около 30% ретинол в храните се унищожава от топлинната им обработка. Активността на ретинола е 2 пъти по-висока от каротина, в допълнение, последната е само 30-40% абсорбирана в червата. Ето защо при оценката на приема на диети се счита, че 1 mg ретинол приблизително съответства на 6 mg каротеноиди.

Определяне на ретинол (витамин А) и каротеноиди в серум според Bessey при модифицирането на LA Anisimova

Принцип на метода

Определянето на витамин А и каротеноидите се базира на тяхната хидролиза в алкален алкохолен разтвор, последвано от екстракция със смес от органични разтворители.

Реагенти

• 11 М разтвор на калиев хидроксид (КОН).
• 96% етилов алкохол.
• 1 М разтвор на калиев хидроксид (КОН) в 96% етилов алкохол: 1 обем от 11 М разтвор на КОН се смесва с 10 обема от 96% етилов алкохол. Реагентът се приготвя в деня на изследването. Ако се получи оцветяване по време на смесването, алкохолът трябва да се почисти чрез дестилация преди употреба.
• Ксилол, х.ч.
• Октан, h.ch.
• Смес от ксилен-октан: приготвена чрез смесване на равни количества ксилен и октан.

Изследванията се извършват върху спектрофотометър.

Процесът на определяне на витамин А

Кръвта, взета от пръста (около 1 ml), се въвежда в етикета на центрофугата и се поставя в стъклена чаша с топла вода (температура 40-45 ° С) в продължение на 20-30 минути. За да се отдели серум, кръвният съсирек се навива внимателно около края на епруветката с тънка стъклена пръчка и се центрофугира при 3000 об / мин за 10 минути.

Изберете 0.12 ml серум и го прехвърлете в алуминиева епруветка, след това добавете 0.12 ml 1M разтвор на алкохолен калиев хидроксид. Съдържанието се разклаща обилно.

Епруветките с проби се поставят във водна баня за 20 минути при температура 60 ° С за хидролиза.

Пробите се охлаждат и към тях се добавят 0.12 ml смес от ксилол-октан и се разклаща енергично в продължение на 10-15 секунди. Охладете отново и центрофугирайте.

Внимателно отстранете горния слой, съдържащ витамин А и каротеноидите, с пипета Pasteur с гумена кутия и го прехвърлете на микросфери.

Пробите са спектрофотометрични при дължина на вълната 328 nm - за определяне на витамин А и при дължина на вълната 460 nm - за определяне на каротеноидите.

След спектрофотометрия изследваната проба се подлага на ултравиолетово лъчение за унищожаване на витамин А. За тази цел, на разстояние 15-20 см от кварцови микрокюветки избран (бактерицидно) лампата така, че облъчването открита част на кюветата, пълни с течност; времето за облъчване е 45-60 минути.

Пробите са многократно спектрофотометрични при дължина на вълната 328 nm. Съдържанието на витамин А се определя от разликата в стойностите на екстинкция (оптична плътност), като се взема предвид коефициентът (фактор) 637, изчислен от Bessey за витамин А.

Изчислението се извършва по формулата:

X = 637 × (Е328 (1) - Е328 (2)),

Където X е съдържанието на витамин А, μg / dL; 637 е коефициентът, изчислен от Bessey за определяне на витамин А; Е328 (1) - оптичната плътност на разтвора преди облъчването; E328 (2) е оптичната плътност на разтвора след облъчването.

Коефициентът за прехвърляне на концентрацията на витамин А от μg / dL в μmol / l е 0,035.

Съдържанието на каротеноиди се изчислява по формулата:

X = 480-Е480,

Където X е съдържанието на каротеноиди, μg / dL; 480 е коефициентът, изчислен от Bessey за определяне на каротеноидите; Е480 е оптичната плътност на тествания разтвор.

Забележка

Според Bessey по време на проучванията може да се вземат по-големи или по-малки серумни обеми, но съотношението му към обема на алкохолния разтвор трябва да бъде постоянно при всяка промяна в обема (количеството) на сместа от ксилол-октан.

Нормата в съдържанието на витамин А в кръвния серум е: при новородени и кърмачета - 160-270 μg / l; при възрастни, 1,05-2,45 μmol / l (300-700 μg / l). Съдържанието на каротеноиди в серума за възрастни е 800-2300 μg / l.