Конфокална микроскопия

Конфокалната микроскопия в момента се счита за един от най-обещаващите методи за in vivo изобразяване на кожата, поради което интересът към нея е необичайно висок както сред клиницистите, така и сред представителите на изследователски институти.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Възможности за конфокална микроскопия

В дерматологията конфокалната лазерна микроскопия се използва за:

• изследване на проникването на съединенията в кожата (пътища на проникване, кинетика, разпределение в кожата);
• наблюдение на функционирането на жлезите (определяне на активното и пасивното състояние);
• изследвания на микроциркулаторното русло (включително в реално време);
• диагностика на неоплазми.

Без да обсъждаме предимствата и недостатъците на гореспоменатите видове конфокална микроскопия, отбелязваме, че през последните години флуоресцентната лазерна конфокална микроскопия става все по-популярна.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Конфокална микроскопия за изследване на кожата

Конфокалният микроскоп предоставя две безценни възможности - изследване на тъкани на клетъчно ниво в състояние на физиологична жизнена активност и демонстриране на резултатите от изследването (т.е. клетъчната активност) в четири измерения - височина, ширина, дълбочина и време. За качеството на изображението и дълбочината на изследването най-важна роля играе способността на тъканта да пропуска светлина, с други думи, нейната прозрачност. Методът на конфокална микроскопия е безконтактен, светлинният лъч не причинява никаква вреда или дискомфорт на изследвания пациент или на експерименталното животно.

За изследване на кожата се използва конфокална сканираща лазерна микроскопия (CSLM). Методът позволява да се видят епидермисът и папиларният слой на дермата с резолюция, близка до хистологичната. Всички резултати от изследването се показват на монитора и се запазват като пакет от файлове с изображения (като микрофилм (в динамика) или микрофотографии).

Има два вида метод:

• отразяващ (отражателен CSLM) - базиран на факта, че различните вътреклетъчни и междуклетъчни структури имат различни коефициенти на пречупване на светлината, което позволява получаване на контрастно изображение.
• флуоресценция (флуоресценция CSLM) - използва лазерна светлина, която прониква през кожата и възбужда екзо- или ендохромофори в нея, които в отговор започват да излъчват фотони (т.е. флуоресцират).

Латералната резолюция е минималното разстояние между точки, разположени в хоризонтална равнина, т.е. равнина, успоредна на повърхността на кожата. Аксиалната резолюция е минималното разстояние между точки, разположени в равнина, перпендикулярна на повърхността на кожата.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

История на конфокалната микроскопия

Идеята за създаване на микроскоп, способен да показва срез от жива тъкан на клетъчно ниво, е била активно разработена преди 130 години. Основният елемент на съвременните микроскопи е проектиран в края на 19 век и е представлявал въртящ се диск с малки дупки, разположени в спирала. Този диск е изобретен през 1883 г. от немския студент Паул Нипков, на когото е наречен - дискът на Нипков (или дискът на Нипков). Изобретението се основава на способността на светлината, преминаваща през малки дупки в диска и увеличителна леща, да прониква дълбоко в тъканта и да осветява клетъчен фрагмент на разстояние от повърхността. Когато дискът се върти бързо, фрагментите образуват единна картина. Чрез отдалечаване или приближаване на структурата до обекта е възможно да се променя дълбочината на оптичния срез на изследваната тъкан.

Едва с появата на видеорекордери през 80-те години на миналия век и компютри, способни да обработват изображения, в началото на 90-те години на миналия век, стана възможно създаването и ефективното използване на съвременните микроскопи, които се използват днес.