Хемопоетични стволови клетки от кръвта на пъпната връв

Кръвта от пъпна връв действа като източник на хематопоетични стволови клетки върху пролиферативния потенциал и възможностите за репопулация на хематопоетични клетки. Многократно е показано, че по време на доставката кръвта от пъпна връв съдържа достатъчно голям брой лошо ангажирани хематопоетични прогениторни клетки. Някои автори смятат, че предимството на трансплантирането на хематопоетични стволови клетки от кръв от пъпна връв е, че няма нужда да се търси донор, съвместим с HLA антигени. Според тях, незрялост на имунната система причинява новороденото намалява функционална активност на имунокомпетентни клетки и, съответно, по-ниска от трансплантация на костен мозък, честотата на тежка реакция "трансплантат срещу гостоприемник". В този клетъчен трансплант оцеляване на кръв от пъпна връв е не по-ниска от клетки на костен мозък, дори и в случай на използване на по-малък брой на GSK прилага на 1 кг от теглото на пациента. Въпреки това, според нас, оптималният брой на въпроса трансплантиран кръв от пъпна връв клетки, необходими за ефективно присаждане в тялото на реципиента, тяхната имунологична съвместимостта и редица други аспекти на трансплантация на хематопоетични стволови клетки от пъпна връв кръв изисква по-сериозен анализ.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Получаване на хематопоетични стволови клетки от кръв от пъпна връв

Процедурата за получаване на хематопоетични стволови клетки от кръв от пъпната връв изисква приема му непосредствено след раждане и отделянето му от плацентата, когато плацентата е в утробата или ех утробата, както и за Цезарово сечение, но също и ех утробата. Показано е, че в случай на намаляване на времето от раждането до отделянето на новороденото от плацентата до 30 секунди, обемът на получената кръв от пъпна връв нараства средно с 25-40 ml. С по-късна процедура се губи същото количество кръв. Установено е, че ранното отделяне на детето от последващото изгаряне не води до негативни последици за новороденото.

Руската изследователски институт по хематология и кръвопреливане разработен ефективен и евтин технология за двете кръв от пъпна връв при физиологични линии ((70.2 + 25.8) мл) и цезарово сечение ((73.4 + 25.1) мл). Метод за разделяне на кръв от пъпна връв с достатъчно висок добив на мононуклеарни клетки и нуклеация - (83.1 + 9.6) и (83.4 + 14.1)%, съответно. Подобрен метод за криоконсервация на кръв от пъпна връв, което осигурява висока безопасност на мононуклеарни клетки и CFU-GM - (96,8 + 5,7) и (89.6 + 22.6)%, съответно. Беше определена ефективността на метода за отводняване на проби от кръв от пъпна връв, използвайки контейнера "Kompoplast-300" (Русия). Ограда от пъпна връв автори извършват веднага след раждането и отделянето му от плацентата, от гледна точка на поставяне на плацентата в утробата или бивш утробата. Преди пункция на пъпната вена пъпната връв веднъж третира с 5% тинктура от йод, и след това два пъти - 70% етилов алкохол. Кръвта течеше през свързващите тръби към контейнера спонтанно. Продължителността на оградата отнема повече от 10 минути. 66 събрани метод обем дренаж пъпна кръвни проби средно (72 + 28) мл и броят на левкоцитите в пробата е средно пълно - (1,1 + 0,6) х х 107. Анализът на кръв от пъпна връв за стерилност (бактериално замърсяване, HIV-1 вируси на хепатит в и с, сифилис и цитомегаловирусна инфекция) в само една проба са установени IgG-антитела за хепатит с в друго проучване веднъж плацентата след раждането фетален повърхност се поставя върху специална конструкция надолу, кабелът се обработва с 5% натриев йод и 75% етил тата алкохол. Вените на пъпната връв бяха отцедени с игла от трансфузионната система (G16). Кръвта се отцеди в контейнера спонтанно. Обемът на кръвта, взет по този начин, е средно (55 + 25) ml. Хартията G. Kogler сътр (1996) кабел кръв, взета затворен начин и се получава голям обем кръв - средно (79 + 26) мл. Авторите отбелязват, че между 574 мозък кръвни проби съдържат приблизително 7% по-малко от 40 мл кръв, които не позволяват да се използват за трансплантация. К. Isoyama сътр (1996), като кръвта на кабел от активното exfusion използване спринцовки, получен средно 69.1 мл кръв (обем кабел кръв варира от 15 до 135 мл). Накрая, A. Abdel-Mageed PI сътрудници (1997) от punovinnoy вена катетеризация са получени в средно 94 мл кръв от пъпна връв (от 56 до 143 мл).

За да се намали рискът от ятрогенна инфекция и замърсяване от майката секрети разработени затворен събиране система кръв на основата на широко използван transfuzioinoy система Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (САЩ), съдържащ 62,5 мл CPDA (цитрат-фосфат-декстроза с аденин) като антикоагулант. Технологията за получаване на материал е от първостепенно значение за получаване на качеството на пробата по отношение на количеството на съдържание и чистота на клетъчната суспензия на. На съществуващите методи за събиране на кръв от пъпна връв, kotoryeuslovno класифицирани в затворен, полу-отворена и отворен предпочитание система sleduetotdavat първо, като в затворена система значително намалява риска от микробно замърсяване на материала, както и замърсяването на клетъчна суспензия на майка клетката.

А. Nagler и съавтори (1998) извършиха сравнителен анализ на ефикасността на трите системи за вземане на проби от пъпна връв. В първия вариант, процедурата се извършва в затворена система чрез изливане на кръв направо в контейнера. Във втория вариант, кръвта от пъпна връв се получава чрез метода за активно кръвоснабдяване на спринцовки1 с по-нататъшно промиване на вените на плацентата и едновременно оттичане на кръвта в контейнера (отворен метод). В третия вариант, кръвта се изтегля в полуотворена система, като активно се извлича със спринцовки и се промива през артерията на пъпната връв с едновременно изливане в контейнера. В първото изпълнение, авторите получени в обем от кръв от пъпна връв (76.4 + 32.1) мл в съдържанието на левкоцити (10.5 ± 3.6) х 10 ⁶ в 1 мл кръв. Във второто изпълнение, съответните стойности са (174.4 + 42.8) и мл (8.8 + 3.4) х 10 ⁶ / мл; третата - (173.7 + 41.3) и мл (9.3 + 3.8) х 10 ⁶ / мл. Най-честата инфекция на проби от пъпна връв е отбелязана при използване на отворена система. Отбелязва се директна корелация между масата на плацентата и обема на екстрахираната кръв - с нарастващата маса на плацентата се увеличава количеството събрана кръв.

След вземането на проби от кръвта от пъпната връв, стъпката на разделяне следва изолиране на мононуклеарни клетки и пречистване на клетъчната суспензия от еритроцитите. При експерименталните условия, ядрените клетки се изолират чрез метода на тяхното утаяване с метилцелулоза по време на лизирането на амониевите еритроцити с хлорид. Въпреки това, за клинични цели, метилцелулозата не трябва да се използва, тъй като загубата на хемопоетични стволови клетки достига 50-90%. Лизиране на червените кръвни клетки във връзка с големи обеми от работния разтвор в клиниката също едва извършва, въпреки че процентът на разделяне по този начин ядрени клетки с фенотипа на CD34 +, и потомствени клетки CFU-GM функции и CFU-GEMM значително по-висока. Беше съобщено ново средство за изолиране на мононуклеарни клетки в разтвора за плътност на купувача с плътност на градиент (BDS72). Това вещество има следните физиологични параметри: рН - 7.4, осмоларност - 280 mosm / kg, плътност - 1.0720 g / ml. Според авторите с негова помощ е възможно да се изолират до 100% от CD34-положителните клетки и да се отстранят 98% от червените кръвни клетки. Клиниката обаче все още не прилага BDS72.

Методите за разделяне тествани ядрени клетки от кръв от пъпната връв обикновено се използва 10% разтвор на HES или 3% разтвор на желатин. Ефективността на утаяването на еритроцитите и изолирането на ядрени клетки в двата случая е приблизително равна. Въпреки това, в случай на използване като средство желатин утаява възможно да се получи малко по-голям брой на CFU-GM, отколкото при използване на HES. Предполага се, че разликата в ефективността възстановяване CFU-GM неравно скорост поради отлагане на отделните фракции или ядрени клетки способност HES молекули абсорбира върху хематопоетични рецептори на клетъчната повърхност и по този начин блокира тяхната чувствителност към колония стимулиращи фактори, които се използват при култивиране на CFU-GM ин витро. Въпреки това, както sedimenter може да бъде подходящ за изолиране на ядрени клетки в създаването на широкомащабни кръв от пъпна връв банки.

Методите за разделяне и криоконсервация на кръвта от пъпна връв по принцип не се различават от тези, използвани при работа с хемопоетични стволови клетки на периферна кръв и костен мозък на възрастни донори. Но когато подготвя голям брой проби от кръв от пъпна връв за своите банки, методите за разделяне трябва да бъдат, най-вече, евтини. Ето защо, в сегашно време, за съжаление, на нуждите за клинична употреба доказа, че рутинните методи за изолиране и криоконсервация на кръв от пъпна връв клетки, и по-ефективно, но методите остават finansovoemkie експериментаторите много.

Общите критерии за оценка се установили хемопоетични изисквания брой на клетките и за изследването на кръв от пъпната връв на проби, за да се открие инфекциозни агенти. За да се осигури трансплантация на хемопоетични кръвни клетки от пъпна връв, всички кръвни проби трябва да бъдат изследвани главно за хематогенни инфекции и генетични заболявания. Някои автори препоръчват допълнителни специални методи за изследване на кръв от пъпна връв за целите на диагностициране на генетични заболявания като таласемия и сърповидно-клетъчна анемия, аденозин деаминаза дефицит, агамаглобулинемия Брутон, болест Harlera и играч.

Според препоръките Ticheli L. Сътр (1998), във всяка проба от кръв от пъпната връв е необходимо да се определи броя на ядрени клетки, SB34-положителни клетки и CFU-GM, носят HLA-типизиране за определяне на кръвна група АВО и Rh членството. Освен това посяване се извършва бактериологични, серологични тестове за HIV и CMV инфекция, HBsAg, хепатит С, HTLY-I и HTLV-II (Т-клетъчна левкемия, човек), сифилис, токсоплазмоза. Полимеразна верижна реакция към цитомегаловирус и HIV инфекция е задължителна.

Самата процедура за получаване на кръв от пъпна връв трябва да се извършва стриктно в съответствие с принципите на медицинската биоетика. Преди началото на събирането на кръвта е необходимо да се получи съгласието на бременната жена за нейното прилагане. Предварителен разговор с бременната жена да получи информирано съгласие за извършване на всички манипулации, тъй като кръв exfusion пълнене и довършителни документи се извършва само от медицински специалисти. Във всеки случай недопустимо, изпълняващо някоя от тези процедури от страна на персонала с биологични, химически, фармацевтични и други не-медицинско образование, с оглед на нарушаването на установените норми на биоетиката и човешките права. За положителни тестове за носител HBsAg, антитела срещу причинителя на хепатит С, HIV и сифилис кабел кръв не са взети и събраните кръвни проби се изхвърлят и вече унищожени. Трябва да се отбележи, че превоз на латентни инфекции при новородени е много по-рядко, отколкото при възрастни, следователно вероятността хематогенен трансфер и развитие на инфекциозните усложнения на хематопоетични инфузии на кръв от пъпна връв клетки е значително по-ниска, отколкото в случая на трансплантация на костен мозък от възрастни донори.

Важен момент на прилагане на кръв от пъпна връв в клиниката е оценката на присадка, която се базира на количествено определяне на хематопоетични стволови клетки в проба от кръв от пъпна връв и клетки, необходими за трансплантация дози. Стандартите за оптимален брой клетки от пъпна връв, необходими за трансплантация, все още не са разработени. Няма общоприета гледна точка дори при такива рутинни параметри като броя на CD34-позитивните клетки и CFU-GM. Някои автори оценка на потенциала на хематопоетични клетки чрез анализ на дълготрайни култури с определяне на съдържанието на колония образуващи единици, общи за гранулоцити, еритроцити, моноцити и мегакариоцити - CFU-GEMM.

Въпреки това, в клинични условия, стандартната оценка на трансплантацията на пъпна връв обикновено включва само определянето на броя на ядрени или мононуклеарни клетки.

Съхранение на хематопоетични стволови клетки от кръв от пъпна връв

Някои проблеми съществуват в технологията за съхраняване на кръвни клетки от кръв от кръв. Когато криоконсервиране на хематопоетични стволови клетки, за да се постигнат оптимален режим замразяване, трябва да се намали количеството на кръв от пъпна връв и червени кръвни клетки преди отстранени за да се избегне хемолиза и риска от несъвместимост реакция на еритроцитни антигени (ABO, Rh). За тези цели са подходящи различни методи за изолиране на ядрени клетки. В началото на 90-те години на миналия век е най-широко използвания метод за разделяне на ядрени клетки в градиент на плътност на базата на Ficoll с плътност от 1,077 грама / мл, или просмукване с плътност 1,080 грама / мл. Разделяне кабел кръв чрез градиент на плътност позволява да се избере главно моноядрени клетки, но води до значителни загуби на хематопоетични прогениторни клетки - до 30-50%.

Ефективността на утаяване на хидроксиетил нишесте в процеса на изолиране на клетки от пъпна връв се оценява по различни начини. Някои автори показват ниско качество на разделяне, използвайки този метод, докато други изследователи, напротив, сред всички възможни методи предпочитат да разпределят кръвната HSC кръв точно с помощта на 6% разтвор на хидроксиетил нишесте. Това подчертава високата ефективност на утаяване на хемопоетични клетки, което според някои данни достига от 84% до 90%.

Поддръжниците на друга гледна точка смятат, че почти всички фракциониране процеси включват големи загуби yadrosoderzhashih клетки и предлагат да се направи разделяне чрез центрофугиране, отделяне на кръв от пъпна връв на 3 фракции: еритроцити, левкоцити и плазма пръстен. Разделянето на клетките по този начин, изобретателите са установили, че съдържанието на мононуклеарни клетки на ранните хематопоетични прогениторни клетки и клетки с CD34 + имунофенотипа крайна сметка е съответно 90, 88 и 100% от първоначалното ниво. Подобни количества пречиства растеж в този метод на кръв от пъпна връв клетки, получени от други изследователи: след утаяване населените разпределят 92%, 98% - мононуклеарни, 96% - CD34-положителни клетки и 106% на колония образуващи единици.

В края на 90-те години на миналия век, желатинът се използва широко като утаител. В клиничната практика, като се използва желатин хематопоетични стволови клетки, изолирани от кръв от пъпната връв от 1994 г. Насам. Когато се използва 3% разтвор на желатин, ефективността на изолиране на ядрени клетки достига 88-94%. Широкото използване на желатин в създаването на кръв от пъпна връв банка потвърди неговите предимства пред други средства за утайка. Сравнителен анализ на всички по-горе методи за изолиране на ядрени клетки по отношение на тяхното последователно използване във всяка от кръвните проби на тест мозък показва, че оптималните sedimenter-от мононуклеарни клетки с фенотипа CD34 + / CD45 +, както и на броя на CFU-GM и CFU-GEMM е 3% желатинов разтвор. Това се оказва значително по-малко ефективни методи, използвайки градиент Ficoll плътност, както и използването на метил целулоза и хидроксиетил нишесте в която хематопоетична клетъчна загуба достига 60%.

Разширяването на обема на трансплантация на стволови клетки от кръвта от пъпна връв се свързва не само с разработването на методи за тяхното производство, но и със съхранението им. Има много проблеми, пряко свързани с подготовката на кръвта от пъпна връв за дългосрочно съхранение и избора на оптимална технология за криоконсервиране на нейните проби. Сред тях са въпросите за целесъобразността при извършването на процедури за отделяне, използването на различни криоконсервиращи средства и използването на методи за приготвяне на размразени клетки за трансплантация. Транспортирането на местни проби от кръв от пъпна връв често се извършва от райони, отдалечени от хематологични центрове. Във връзка с това възниква проблемът с допустимите периоди за съхранение на пъпната връв от момента на получаването й до началото на криоконсервирането, което е от особено значение за развитието на банките от пъпна връв.

Изследването на функционалната активност на хематопоетични клетки от пъпна връв след продължително съхранение (до 12 години) в течен азот показва, че около 95% от хематопоетични клетки през това време не губят своето високо пролиферативно капацитет. Хартията Yurasova S. И сътр (1997) показват, че кръв от пъпна връв се съхранява при стайна температура (22 ° С) или при 4 ° С в продължение на 24 и 48 часа не се намали значително жизнеспособността на хематопоетични клетки, които първоначалното ниво е подходящо 92 и 88%. Ако обаче времето за съхранение се удължи до три дни, броят на жизнеспособните ядрени клетки в кръвта от пъпна връв е значително намален. В същото време, други изследвания са установили, че по време на съхранение в продължение на 2-3 дни при температура от 22 ° С или 4-вече засегнат жизнеспособността на зрели гранулоцити, но не хемопоетични клетки.

На жизнеспособността на кръв от пъпна връв хематопоетични стволови клетки могат да имат отрицателно въздействие на компонентите на системата за събиране. Анализ на ефекта на различни антикоагуланти, който механизъм на действие се дължи на свързването на калциеви йони (ACD, EDTA, XAPD-1) за хематопоетични прогениторни клетки в условия кръв от пъпна връв за съхранение на 24 до 72 часа разкрива тяхното отрицателно въздействие върху жизнеспособността на ядрени клетки. В тази връзка, авторите препоръчват използването на PBS (фосфатен буферен разтвор) с добавянето на нативния хепарин без консервант при концентрация от 20 U / мл, което, според тях, дава възможност да се увеличи продължителността на съхранение нефракциониран кръв от пъпна връв до 72 часа и запазва функционалната активност на колония образуващи единици. Въпреки това, в проучването на опазване CFU-GM и CFU-G показва, че пъпната връв време кръв съхранение преди криоконсервация не трябва да надхвърля девет часа. Очевидно е, че в този случай трябва да се действа на принципа, че ако има противоречиви данни трябва да използват препоръчва минимален срок на съхранение кръв от пъпна връв и да започне програмируеми замразяване изолирани клетки възможно най-бързо.

Когато се замразяват хематопоетични стволови клетки от пъпна връв, 10% разтвор на DMSO обикновено се използва като криозащитен агент. Въпреки това, в допълнение изразена криозащитно диметилсулфоксид действие при концентрация и има директен цитотоксичен ефект, дори с минималната си излагане на хемопоетични клетки от кръв от пъпна връв. За да се намали цитотоксичния ефект на DMSO, се прилагат нулева температура на излагане, увеличаване на скоростта на всички манипулации и многократно промиване след размразяване на проби от пъпна връв.

Институтът по хематология и трансфузиология на Академията по медицински науки на Украйна разработва научна насока от 1995 г. Насам, чиято цел е да изследва кръвта от пъпната връв като алтернативен източник на стволови хемопоетични клетки. По-специално са разработени нови технологии за нискотемпературна криоконсервация на хемопоетични клетки от нефракционирана и фракционирана пъпна връв. Като криозащитен агент се използва медицински поливинилпиролидон с ниско молекулно тегло. Методът на криоконсервиране на нефракционирана пъпна тъкан се основава на оригиналната технология на предварително приготвяне на клетки за замразяване и на техниката на специално третиране на клетъчната суспензия непосредствено преди трансплантацията.

Един от най-важните фактори, влияещи върху нивото на функционалната активност на криоконсервираните хемопоетични стволови клетки, е скоростта на охлаждане на клетъчната суспензия, особено по време на кристализационната фаза. Софтуерен подход за решаване на проблема със скоростта и времето на замразяване осигурява големи възможности за създаване на прости и високоефективни методи за криоконсервиране без измиване на клетъчната суспензия от криопротективите преди трансплантацията.

Степените на незабавно замразяване и размразяване са най-опасни за жизнеспособността на клетките по време на подготовката им. При замразяване на хемопоетичните клетки значителна част от тях могат да бъдат унищожени в момента на прехода на междуклетъчната среда от течността към кристализацията в твърдата фаза. За да се намали процента на клетъчна смърт, се използват криозащитни средства, механизмите на действие и криопротективната ефективност са адекватно обхванати в научната литература.

Обещаващ посока оптимизация Техники за криоконсервация на костен мозък и кръв от пъпна връв клетки е да се комбинират в същия разтвор на ниски концентрации на криопротектори с различни механизми на действие, например, в качеството на вътреклетъчното ниво на DMSO и хидроксиетил нишесте или албумин, притежаващ извънклетъчен обгръщащия ефект.

За криосъхранение на мозък кръвни клетки традиционно се използва 20% разтвор на DMSO който е постоянно механично разбъркване в ледена баня, бавно се излива в клетъчната суспензия да се постигне равна (1: 1) обемното съотношение на клетъчна суспензия и криопротектори. Крайната концентрация на диметилсулфоксид е 10%. След това клетъчната суспензия се охлажда върху софтуерен криостат със скорост от HS / min до -40 ° С, след което скоростта на охлаждане се повишава до 10 ° C / min. След достигане на -100 ° С, контейнерът с клетъчната суспензия се поставя в течен азот (-196 ° С). С този метод на криоконсервация безопасността на функционално активните мононуклеарни клетки след размразяване достига 85% от първоначалното ниво.

Модификациите на методите за криоконсервация са насочени към намаляване концентрацията на DMSO чрез добавяне на хидроксиетил нишесте (крайните концентрации на диметил сулфоксид и хидроксиетил нишесте са съответно 5% и 6%). Високата ефективност на тази комбинация от криопротеканти се наблюдава, когато суспензията на миелоидните клетки е замразена, без по-малка цитопротекция, отколкото с единичен 10% разтвор на диметилсулфоксид. Броят на жизнеспособните ядрени клетки достигна 96.7% от изходното ниво и тяхната функционална активност, оценена с броя на CFU-GM, беше 81.8%.

При използване на диметил сулфоксид разтвор при концентрации, вариращи от 5 до 10%, в комбинация с 4% хидроксиетил нишесте (крайна концентрация) установено, че запазването на CD34-позитивни клетки в тези граници диметилсулфоксид практически непроменен. В същото време в условията на намаляване на концентрацията на DMSO от 5 до 2,5% се наблюдава маса смърт мозък кръвни клетки - брой жизнеспособни клетки единици се намалява от 85.4 до 12.2%. Други автори заключават, че е 5 и 10% разтвор на диметил сулфоксид (в изпълнение на авторските права - в комбинация с автоложна серум) с максимална ефективност осигури цитозащита време криоконсервация на кръв от пъпна връв HSC. В допълнение, висока безопасност последователно замразени и размразени клетки се маркира в случай на комбинация от 5 или 10% DMSO 4% разтвор на хидроксиетил нишесте, по-специално при контролирана скорост на охлаждане от TOS / мин. В друг хартия използва криозащитно разтвор, състоящ се от три съставки вече - DMSO, пречистен човешки албумин и RPMI среда в съотношение 1: 4: 5, който се добавя към клетъчната суспензия до един равни обемни съотношения (крайна концентрация DMSO беше 5%). След размразяване във водна баня при температура + 4 ° C, безопасността на CFU-GM надвиши 94%.

Някои автори предполагат използването на нефракционирана кръв от пъпна връв за криоконсервиране, тъй като значителни количества хематопоетични клетки се губят по време на отстраняването на червените кръвни клетки. В това изпълнение, 10% разтвор на диметилсулфоксид се използва за защита на мононуклеарни клетки от увреждащия ефект на крикокристализацията. Замразяването се извършва при постоянна скорост на охлаждане от HS / min до -80 ° С, след което суспензията от клетки от пъпна връв се потапя в течен азот. С този метод на замразяване се извършва частичен лизис на еритроцитите, поради което кръвните проби не изискват фракциониране. След размразяване, клетъчната суспензия се промива от свободен хемоглобин и диметилсулфоксид в разтвор на човешки албумин или в автоложния серум на пациента и се използва за трансплантация.

Съхраняване на хематопоетични прогениторни клетки след размразяване нефракциониран кръв от пъпна връв е наистина по-висока от фракционира, но във връзка с krioustoychivostyu на червените кръвни клетки може да предизвика сериозни проблеми в резултат на пост-преливане трансфузионна на АВО-несъвместима червени кръвни клетки. В допълнение, обемът на съхраняваната нефракционирана кръв значително се увеличава. От клинична гледна точка, още по-предпочитано криоконсервация предварително изолиран и пречистен от други клетъчни фракции от хематопоетични клетки от пъпна връв.

По-специално, методът е криоконсервиране на кръвни клетки кабел фракционират позволява отстраняване на еритроцитите в подготовка за замразяване, при който се използва 6% разтвор на хидроксиетил нишесте в разтвора на състав plazmozameshchath "Stabizol". След размразяване така получената клетъчна суспензия е готова за клинично използване без допълнителна манипулация.

Понастоящем има много доста ефективни начини за криоконсервация на кръвта от пъпна връв. Основната разлика е, че кръвните проби са замразени нефракционирани или подложени на разделяне на клетъчни фракции по време на етапа на получаване и събрани ядрени клетки без смес от еритроцити.

Трансплантация на хемопоетични стволови клетки от кръв от пъпна връв

В края на 80-те - началото на 90-те години на миналия век е установено, че кръвта от пъпна връв, която доставя плода по време на бременност, се характеризира с високо съдържание на хематопоетични стволови клетки. Относителната простота на получаване на клетки от пъпна връв и липсата на очевидни етични проблеми насърчиха използването на стволови клетки от пъпна връв в практиката на медицината. Първата успешна трансплантация на кръв от пъпна връв към дете с анемия на Fanconi служи като отправна точка за разширяване на обемите на трансплантация на стволови клетки от пъпна връв и създаване на система за нейното банкиране. В глобалната система на банките за кръвни клетки от пъпна връв най-голям е Нюйоркският център за плацентарна кръв, който се намира в баланса на Националните институти по здравеопазване. Броят на съхраняваните кръвни проби в тази банка е близо до 20 LLC. Броят на реципиентите (предимно деца) също нараства и е извършена успешна трансплантация. Според Американското министерство на здравеопазването безпокойният период на посттрансплантационния живот на реципиентите на HSC кръв от кръв вече е надвишил 10 години.

Това не е изненадващо, тъй като множество проучвания на хемопоетични потенциал на кръвта от пъпната връв са показали, че количеството и качеството на най-ранните стволови клетки, не само не отстъпва на един възрастен човешки костен мозък, но също и от някои мерки, които надхвърлят. По-висок пролиферативен потенциал на стволови клетки от пъпна връв, причинени развитието клетъчни сигнални функции, присъствието на рецептори на HSCs на специфични фактори на растежа, капацитетът на кръв от пъпна връв клетки за автокринен производство на растежни фактори, големия размер и дължината на теломерите.

По този начин, геномни и фенотипните характеристики на хематопоетични стволови клетки от пъпна връв качество кръв предопределят присаждане висок потенциал възстановяване донор хематопоетични в реципиента.

Предимства на хематопоетичните стволови клетки от пъпна връв

Сред реалните ползи от използването на хемопоетични мозък кръвни стволови клетки за трансплантация в сравнение с други източници на хемопоетични клетки трябва да се отбележи почти нулев риск за здравето на донора (ако не се разглежда като такава плацента), като елиминира нуждата от обща анестезия. Използването на пъпната връв трансплантация кръвни клетки се разширява поради частично от HLA-съвместима система присадка (несъвместимости от един до три антигени). Техниката на дългосрочно съхранение на кръв от пъпна връв хематопоетични клетки в замразено състояние, което увеличава вероятността за получаване на редки HLA-тип и намалява търсене време HLA-съвпадащи алогенна трансплантация. В същото време рискът от развитие на някои латентни инфекции, предавани по пътя на предаване, е значително намален. Освен това съществува и евтина форма на биологично животозастраховане във връзка с възможността за използване на кръвни клетки от пъпна връв за автоложна трансплантация.

Въпреки това, тъй като малки обеми кръв, които могат да бъдат събрани от плацентата (средно не повече от 100 мл) на преден план проблема за получаване на максималния възможен размер на кръв от вената на пъпна връв при стриктно спазване на условията на минимален риск от бактериално замърсяване на пъпна получени проби кръв от пъпна връв.

Примитивни хематопоетични клетки от кръв от пъпната връв обикновено се идентифицират чрез присъствието на тяхната повърхност glikofosfoproteina CD34, и въз основа на техните функционални свойства чрез изследване на клоногенен анализ или колония образуването ин витро. Сравнителен анализ показва, че в кръв от пъпна връв и костен мозък максимално съдържание на CD34-позитивни мононуклеарни клетки в фракция са съответно 1.6 и 5.0%, максималното ниво на колония образуващи единици в субпопулация на CD34 + клетки - 80 и 25%, общо клониране ефективност на CD34 + -клетките - 88 и 58%, максималната колония образуващи клетки с висок пролиферативен потенциал (HPP-CFC в -populyatsii CD34 +) - 50 и 6,5%. Трябва да се добави, че ефективността на клониране на CD34 + CD38-клетки и способността да отговорят на цитокин стимулиране също по-висока в хематопоетични стволови клетки от кръв от пъпна връв.

Комбинации фенотипни антигени Thy-1, CD34 и CD45RA потвърждава висок пролиферативен капацитет на кръв от пъпна връв хематопоетични клетки и експресията на трите антигени на повърхността на кръвни клетки мозък показва, че те принадлежат на стволови клетки. Освен това е установено, че кръвта от пъпна връв съдържа клетки с CD34 + фенотип, които нямат маркери за линейна диференциация. Ниво по мозък кръвни клетки субпопулации с профила фенотипна на CD34 + / Lin е приблизително 1% от общия брой на CD34-позитивни клетки. Хематопоетични прогениторни клетки пораждат кръвта на кабела като лимфоидни клетъчни линии, както и броя на линеен плурипотентни миелоидна клетъчна диференциация, което показва, че те принадлежат на стволови клетки.

Както вече беше споменато, съществените разлики между костния мозък и кръвта от пъпна връв са количеството хематопоетични клетки, използвани за трансплантация, получени с една процедура. Когато костен мозък загуба трансплантация на клетъчна маса в процеса разделяне, криоконсервиране, размразяването и тестване са допустими в диапазона от 40-50%, кръв от пъпна връв клетки като загубата е от голямо значение, тъй като при използване на недостатъчния брой на HSC трансплантация може да бъде непоносимо. Според Г. Kogler сътр (1998), за клетъчна трансплантация в тялото реципиент тегло 10 кг потенциал трансплантация (общ брой на събраните кръвни кабел проби - 2098) може да бъде всички кръвни кабел проби, телесното тегло 35 кг - 67% и само 25% от пробите ще могат да осигурят ефективна трансплантация при пациенти с телесно тегло 50-70 kg. Тази клинична ситуация показва необходимостта от оптимизиране и подобряване на ефективността на съществуващите методи за вземане на проби, възпроизвеждане и съхранение на клетки от пъпна връв. Следователно, въпросите за стандартизиране на методи за вземане на проби, тестване, разделяне и криоконсервация на кръв от пъпна връв е сега широко дискутирани в литературата за създаване на кръвни банки, използването му в клиниката, както и за създаване на условия и условията на съхранение на хематопоетични стволови клетки от кръв от пъпна връв.

[7], [8], [9],

Използването на хематопоетични стволови клетки от пъпна връв в медицината

Обикновено до 10 ⁶ хемопоетични стволови клетки могат да бъдат изолирани от кръвта от пъпна връв , рядко повече. Във връзка с това до днес остава въпросът за достатъчността на толкова много хемопоетични кръвни клетки от кръв, за да се възстанови хематопоезата на възрастен реципиент. Становищата по този въпрос бяха разделени. Някои изследователи смятат, че това количество е достатъчно за деца трансплантация, но твърде малък, за да се пресаждат възрастен човек, за които прилагането е оптимално (7-10) х 10 ⁶ CD34-положителни клетки на 1 кг телесно тегло - средно 7 х 10 ⁸ за всяка трансплантация. От тези изчисления следва, че една проба от пъпна връв съдържа 700 пъти по-малко хематопоетични стволови клетки, отколкото е необходимо за една трансплантация на възрастен пациент. Обаче такава количествена оценка се прави по аналогия с броя на трансфузираните клетки в костния мозък и напълно игнорира онтогенетичните характеристики на хематопоезата.

По-специално, игнорира факта, че по-висок пролиферативен капацитет на хематопоетични стволови клетки от кръв от пъпна връв, в сравнение с хематопоетични потомствени клетки от костен мозък. Резултатите от изследванията на потенциала за образуване на колонии in vitro предполагат, че една доза от кръв от пъпна връв може да осигури възстановяването на хематопоезата на възрастен реципиент. От друга страна, не трябва да се забравя, че броят на HSCs намалява дори в процеса на ембрионалното развитие: съдържанието на CD34-позитивни клетки в кръвта на пъпна връв се линейно намалява 5 пъти в продължение на 20 седмици (кръв за изследване се получава при предсрочно прекратяване на бременност) за 40 седмици от бременността (периодът на физиологичните раждания), който е придружен от успоредно, постоянно увеличаване на изразяването на линейни маркери за цитодиференциране.

Поради липсата на стандартизиран подход за количествено определяне в мозък кръвни проби на прогениторни клетки спор оптималната доза на хематопоетични стволови клетки от пъпна кръв продължава. Някои изследователи смятат, че тъй като изборът на критерии на кръвни проби от пъпна връв може да се използва броят на ядрени клетки и мононуклеарни клетки, преизчисляване на телесното тегло на получателя, т.е. Дозата си. Някои автори смятат, че минималният праг на количествено определяне на CD34 + клетки, дори и за автотрансплантация GCW е 2 × 10 ⁶ / кг. Увеличаването на дозата на хематопоетични клетки 5 х 10 ⁶ клетки / кг (общо 2.5) вече осигурява по-подходящ за началото на периода след трансплантацията, намалява честотата на инфекциозните усложнения и съкращава периода на превантивна антибиотична терапия.

Според Е. Клъкман сътр (1998) по хематология за успешна трансплантация на пъпна връв кръвни клетки е въвеждането на най-малко 3.7 х 10 ⁷ ядрени клетки на 1 кг телесно тегло на реципиента. Чрез намаляване на дозата на хематопоетични стволови клетки до 1 х 10 ⁷ или по-малко от ядрени клетки на 1 кг телесно тегло на пациента и риска от повреда на присадката повтарящи рак на кръвта се увеличава драстично. Трябва да се признае, че минималният брой на прогениторните клетки, необходими за бързото възстановяване на хемопоезата след GSG алотрансплантацията, все още не е известен. Теоретично това може да бъде постигнато с помощта на единична клетка, но в клиничната трансплантация на костен мозък бързо и стабилно присаждане гарантирано преливане поне (1-3) х 10 ⁸ ядрени клетки на 1 кг телесно тегло на пациента.

Неотдавнашно подробно проучване за определяне на оптималното количество HSC в онкохематологията включваше наблюдението на пациенти от три групи, изолирани в зависимост от съдържанието на CD34-позитивни клетки в трансплантиращия материал. Пациентите бяха приложени първата група (3-5) х 10 ⁶ клетки / кг. GSK дозата при пациенти от втората група възлиза на (5-10) х 10 ⁶ клетки / кг и третата група от пациенти с трансплантиран повече от 10 х 10 ⁶ CD34 + клетки / кг. Най-добри резултати бяха наблюдавани в групата на реципиенти, третирани с номера на присадка на CD34-позитивни клетки бяха равна на (3-5) х 10 ⁶ / кг. С увеличаване на дозите на трансплантирани клетки от 5 х 10 ⁶ / кг са установени статистически значими предимства. По този начин много голямо съдържание HSCs в трансплантацията (> 10 х 10 х ⁶ / кг) е свързано със значително количество от остатъчен реинфузия на туморни клетки, което води до рецидив на заболяването. Нямаше пряка връзка между броя на трансплантираните алогенни прогениторни клетки и развитието на реакцията "присадка срещу приемник".

Натрупаният опит в световен мащаб за трансплантация на кръв от пъпната връв на HSC потвърждава техния висок потенциал за възстановяване. Степента на присаждане на трансплантацията на кръв от пъпна връв корелира с въведения брой въведени ядра. Най-добри резултати се наблюдават при трансплантация от 3 × 10 ⁷ / kg, докато за костния мозък тази доза е 2 × 10 ⁸ / kg. Според данните на координационните центрове в края на 2000 г. В света са направени 1200 трансплантации на клетки от пъпна връв, главно от роднини на донори (83%). Очевидно, кръвта от пъпна връв трябва да се разглежда като алтернатива на костния мозък за трансплантация при пациенти с хемообластоза.

Въпреки това, неонатална характер Cordova източник на хематопоетичната тъкан насърчаване поради наличието на функционални характеристики на неговата GCW. Въпреки това, само клиничен опит може да даде отговор на въпроса на адекватността на проба от кръв от пъпната връв за възрастен хематопоетични разтваряне на реципиента с аплазия на хематопоеза. Трансплантация на мозък кръвни клетки се използва за лечение на много заболявания на туморен и не-туморен характер: левкемии и миелодиспластични синдроми, неходжкинов лимфом, и невробластом, апластична анемия, вродена Fanconi анемия и Diamond Черно фен, дефицит на левкоцитна адхезия, синдром Barr, синдром Gunther заболяване Harlera, таласемия ,

Внимателното и отделно изследване заслужават имунологичните аспекти на трансплантацията на кръвотворни клетки от кръвта от пъпна връв. Показано е, че в случай на трансплантация на стволови клетки от пъпна връв от донори с непълни HLA-съвпадащи резултати трансплантация са съвсем задоволително, че, според авторите, което показва по-ниско кръвно имунореактивност кабел от костен мозък.

Подробно изследване на клетъчния състав на кръвта от пъпната връв показва характеристики на двете фенотипна спектър на ефекторни клетки на имунната система и тяхната функционална активност, което позволява да се разгледа кръв от пъпна връв като източник на HSCs с относително нисък риск от реакция "трансплантат срещу гостоприемник". Допълнителни характеристики Функционално незрялост имунокомпетентни мозък кръвни клетки трябва да се отбележи дисбаланс на продукцията на цитокини и намаляване на чувствителността на цитокини нов регулиране на имунния отговор. Възникнали в резултат на инхибирането на активността на цитотоксични лимфоцити се счита за фактор, допринасящ за образуването на имунологична толерантност към трансплантирания хематопоетична тъкан. В популация на кръв от пъпна връв лимфоцити, за разлика от периферна кръв и костен мозък от възрастни донори, контролирани неактивни, незрели клетки и супресорни клетки. Това показва намалена наличност на Т-лимфоцити от пъпна връв към имунния отговор. Важна характеристика на моноцитната популация на клетки от пъпна връв е ниското съдържание на функционално пълни и активни антиген-представящи клетки.

От една страна, ниска степен на зрялост на ефекторни клетки на имунната система в мозък кръвни измервания се простира до използването му в клиниката, тъй като тези функции позволяват намаляването на интензитета на имунната конфликт между донора и реципиента клетки. Но, от друга страна, ние знаем за съществуването на връзка между степента на реакция "реакция на присадката срещу домакина" и трансплантация антитуморен ефект, т.е., ефектът от развитието на "присадка срещу левкемия". Във връзка с това е проведено изследване на антитуморната цитотоксичност на клетките от пъпна връв. Резултатите показват, че въпреки много отслабена имунна реакция на кръв от пъпна връв клетки към антигенна стимулация, активирани на първо място са естествени клетки убийци и killeropodobnymi клетки, които участват активно в механизмите на прилагане на анти-туморна цитотоксичност. Освен това, в лимфоцитни субпопулации кръв от пъпна връв са открити с фенотип CD16 + CD56 + и CD16 "TCRa / р +. Предполага се, че тези клетки са в активирана форма прилагат реакция" присадка срещу левкемия ".

В Института по онкология, академия на медицински науки на Украйна криоконсервирани хематопоетични клетки от кръв от пъпната връв се прилагат на пациенти с рак с персистираща хипоплазия на хематопоезата поради химиотерапия и лъчетерапия. При тези пациенти, трансплантация на хематопоетични стволови клетки от кръв от пъпна връв ефективно възстановява кръв потискане, както е видно от постоянна височина на зрелите оформени елементи в периферната кръв, както и увеличение на показатели, характеризиращи състоянието на клетъчен и хуморален имунитет. Стабилност repopulyatsionnogo ефект след трансплантация на хематопоетични клетки от пъпна връв позволява продължение облъчване и химиотерапия, без прекъсване на лечението. Има данни от пациентите по-голяма ефективност на алографт рак на кръвни стволови клетки кабел: годишен риск от рецидив на тумор в тяхната употреба е 25% срещу 40% при пациенти с трансплантиран алогенна ген на костен мозък.

Механизмът на действие на криоконсервирани стволови клетки от пъпна връв трябва да се разглежда като резултат от хуморален стимулиране на получателите хематопоезата, причинени от уникалната способност на новородени клетки за автокринен производство на хематопоетични растежни фактори, както и в резултат на временна присаждането на донорни клетки (като потвърждение - значително увеличение на съдържанието на периферна кръв фетален хемоглобин получател 7-15 ия ден след трансфузия в сравнение с базовата линия). Липса на получателите на реакции след трансфузия кръв от пъпна връв - резултат от неговата относителна толерантност на имунни клетки, както и критерия за доверие полезността на криоконсервирана биологичен материал.

Прогениторни клетки Т лимфоцити кабел кръв убиец в състояние на активиране под въздействието на екзогенен цитокин стимулиране, който се използва за разработване на нови екс виво и ин виво в методи за индуциране на анти-туморни цитотоксична лимфоидни клетки за последващо имунотерапия трансплантация. В допълнение, "незрялост" на генома на пъпна кръв имунни клетки позволява използването им за повишаване на антитуморната активност чрез молекулно моделиране.

Днес кръвта от пъпна връв намери широко приложение предимно в педиатричната хематология. При деца с остра левкемия алотрансплантация на хематопоетични стволови клетки от кръв от пъпна връв, в сравнение с костен мозък алографти, значително намалява честотата на реакция "трансплантат срещу гостоприемник". Въпреки това, следва да се отбележи в продължение на дълъг период от неутропения и тромбоцитопения, и за съжаление, по-високо ниво от 100-дневната смъртност след трансплантацията. По-дълъг период на възстановяване на кръвните гранулоцити и тромбоцити периферни може да се дължи на недостатъчно диференциация на отделните субпопулации на CD34 позитивни клетки от кръв от пъпната връв, както е видно от ниското ниво на поглъщане на радиоактивни родамин и ниска експресия на CD38 антигени на тяхната повърхност.

В същото време, трансплантация на хематопоетични стволови клетки от пъпна кръв на възрастни пациенти, извършени поради липса на двете съвместим несвързан донор на костен мозък, както и възможностите за мобилизиране на автоложна HSC показа висок годишен оцеляване повтарящи се свободно при пациенти на възраст под 30 години (73%) , Разширяване получател възрастова група (18-46 години) намалява оцеляването до 53%.

Количествен анализ на клетки с фенотип CD34 + костен мозък и пъпна връв кръв показа по-висока (3.5 пъти) тяхното съдържание в костния мозък, но кръв от пъпна връв показва значително преобладаване на клетки с фенотипна профил на CD34 + HLA-DR .Izvestno, chtokletkikrovisimmunologicheskimi маркери CD34 + HLA-DR пролиферират по-активен от клетки с имунофенотипа CD34 + HLA-DR +, както се потвърждава от експериментални изследвания на растежа на дългосрочно култивиране на хематопоетични клетки ин витро. Примитивни клетки предшественици с фенотип CD34 + CD38, съдържащи се в кръв от пъпна връв и костен мозък, но кръв от пъпна връв клетки с маркера избран CD34 + CD38 имат по-висока клоногенната активност от хематопоетични клетки на същия фенотип, изолирани от възрастен донор на костен мозък. В допълнение, кръв от пъпната връв клетки с CD34 + CD38 имунофенотипа да пролиферират в отговор на стимулиране с цитокини (IL-3, IL-6, G-CSF) и възпроизвеждат 7 пъти повече колонии в дълготрайни култури от костен мозък.

Банки от стволови клетки от пъпна връв

За правилното развитие на новата областта на практическата медицина - трансплантация на стволови клетки от пъпна връв, както и за извършване на трансплантации на хемопоетични костен мозък стволови клетки, трябва да имате широка мрежа от кръвни банки, които вече са се установили в САЩ и Европа. Вътрешките мрежи на банките за кръвни клетки от пъпна връв са обединени от Асоциацията на банките Netcord. Възможността за създаване на международна асоциация на мозък кръвни банки се определя от факта, че за извършване на независими трансплантации нужда от голям брой проби от кръв от пъпната връв въведен, което позволява да се избере HLA-идентични донора. Само създаването на система от банки със съхранение на кръвни проби от различни HLA типове в тях наистина може да реши проблема с намирането на необходимия донор. Организирането на такава система от банки за кръвни клетки от пъпна връв изисква предварителното разработване на етични и правни норми, които понастоящем се обсъждат на международно ниво.

За да се създадат банки за кръвни телца в Украйна, е необходимо да се изработи редица разпоредби и документи.

На първо място, това са въпроси, свързани със стандартизирането на методите за вземане на проби, фракциониране и замразяване на кръв от пъпна връв. Необходимо е да се регламентират правилата за пъпна връв за събиране на кръв в болниците, в съответствие с изискванията на медицинската етика, за да се определи минималния размер на кръвта от пъпната връв, което осигурява успешна трансплантация. Трябва да се сравняват и стандартизация на различни критерии за оценка на качеството и броя на хематопоетични стволови клетки, както и методи за HLA-типизиране и методите за диагностициране на генетични и инфекциозни заболявания, които могат да се предават от инфузията на пъпна връв кръвни клетки установи общи критерии за подбор здрави донори. Заслужава също така да се обсъди създаването на отделни съоръжения за съхранение на серум, клетки и ДНК, получени от кръв от пъпна връв.

Необходимо е да се организира компютърна мрежа от данни за кръвта от пъпна връв за осъществяване на връзката с регистрите на донорите на костния мозък. За по-нататъшно развитие на клетъчната трансплантология трябва да се разработят специални протоколи за сравняване на резултатите от трансплантацията на пъпна връв и костен мозък от идентични на HLA роднини и несвързани донори. При работа с етични и правни проблеми на клиничната употреба на кръв от пъпна връв клетки могат да помогнат стандартизира документация, включително информираното съгласие на родителите, както и известие на майката или роднини на детето определени от генетично и / или инфекциозни заболявания.

Определяне състоянието на за развитието на клетъчната трансплантация в Украйна ще бъде приемането на Националната програма за дарението на стволови клетки и развитието на международното сътрудничество с други страни в рамките на Световната асоциация на донор на костен мозък (WMDA), програмата донор на костен мозък Националната САЩ (NMDP) и други регистри.

Обобщаване все още кратка история на хемопоетични стволови клетки трансплантация на кръв от пъпната връв, ние отбелязваме, че първото предположение за възможността за клинично приложение на кръвта от пъпната връв, направена в началото на 70-те години, бяха потвърдени през 80-те години на резултатите от експериментални проучвания върху животни, както и през 1988 г. Година е била извършена първата в света трансплантация на хемопоетични клетки от кръв от пъпната връв на човека, а след това започва да се развива глобална мрежа от кръв от пъпна връв банки. След 10 години, броят на пациентите с трансплантирани хематопоетични клетки, кръв от пъпната връв близо до 800. Сред тях са пациенти с различни туморни заболявания (левкемия, лимфом, твърди тумори) и не-туморен (вродена имунна недостатъчност, анемия, заболявания, свързани с метаболитни нарушения) характер.

В кръвта от пъпна връв съдържанието на ранните и ангажирани клетъчни предшественици е по-високо от това в периферната кръв на възрастен. По броя на гранулоцит-макрофаг колония-формиращи единици и техния пролиферативен потенциал на кръв от пъпна връв е много по-голяма от периферната кръв на хора, дори след приложение на растежни фактори. При дългосрочни клетъчни култури in vitro има по-голяма пролиферативна активност и жизнеспособност на клетките от кръвта от пъпна връв, отколкото клетките на костния мозък. Критичните моменти в трансплантация на стволови клетки от пъпна връв са хематопоетични потенциалния брой и ядрени клетки, присъствието на цитомегаловирусна инфекция, HLA-съвместим донора и реципиента, телесното тегло и възрастта на пациента.

Независимо от това, трансплантацията на кръв от пъпна връв трябва да се разглежда като алтернатива на трансплантацията на костен мозък, за да се лекуват тежки кръвни заболявания, особено при деца. Клинични проблеми на трансплантация на пъпна връв кръвни клетки постепенно решени - има вече доста ефективни техники за вземане на проби, разделяне и криоконсервиране на кръвни клетки кабел, предвидени условия за образуването на кръвни банки кабел, методите за изпитване се подобряват ядрени клетки. Оптималното разделяне по време на големи кръв преформа кабел хематопоетични стволови клетки в създаването на банките следва да се разглежда като 3% разтвор на желатин и 6% разтвор на хидроксиетил нишесте.

Perehrestenko P. И сътр (2001) правилно посочи, че трансплантация на мозък кръвни стволови клетки трябва да заеме своето място в комплексните терапевтични мерки за преодоляване на депресия на хематопоезата от различен произход, като GSK кабел кръв се различават в редица значителни предимства, сред които важно е относителната лекота на прибиране на реколтата, не съществува риск за донора, ниско замърсяване на неонатални клетки с вируси и сравнително ниска цена на присаждането. Някои автори предполагат, че трансплантацията на кръв от пъпна връв клетки по-рядко от костно-мозъчни клетки се придружава от усложнения, свързани с реакцията на "присадка срещу гостоприемник", което се дължи в тях, слаба експресия в кръвни мозък клетки на HLA-DR антигени и техните незрялост. Въпреки това, основната популация на ядрени клетки от кръв от пъпната връв са Т-лимфоцити (SDZ-позитивни клетки), чието съдържание е около 50%, което е с 20% по-малко отколкото в периферната кръв на възрастен, но разликите фенотипни на субпопулации на Т-клетки от тях източници са незначителни.

Сред факторите, които влияят директно върху оцеляването на трансплантация на стволови клетки от кръв от пъпната връв, трябва да отбележим, възрастта на пациентите (най-добри резултати се наблюдават при реципиенти на възраст до 5 години), ранно диагностициране на болестта и форма на левкемия (ефективност е значително по-висока в остра левкемия). От голямо значение са дозата на ядрени кръвни клетки от пъпна връв, както и тяхната HLA съвместимост с реципиента. Не е анализ на произшествия на клиничната ефикасност на трансплантация на кръв от пъпна връв GSK по онкология и хематология показва най-добри резултати от лечението, използвайки свързани трансплантации: едногодишна преживяемост без заболяване в този случай достига 63%, докато несвързан трансплантация - само 29%.

По този начин, наличието на голям брой стволови клетки в кръв от пъпна връв и висока способност repopulyatsionnaya неонатални хематопоетични стволови клетки ги правят подходящи за алогенна трансплантация при пациенти с хематологични злокачествени заболявания. Въпреки това, имайте предвид, че рекапитулацията на хематопоезата след трансплантация на хематопоетични стволови клетки от кръв от пъпна връв "се разтяга във времето": възстановяване съдържание в неутрофили от периферна кръв обикновено се появява в края на 6-та седмица, и тромбоцитопения явление изчезне, обикновено след 6 месеца. В допълнение, незрели кръвообразуващите клетки от кръв от пъпната връв не изключват имунологичен конфликт: тежко протичане на остра и хронична реакция "трансплантат срещу гостоприемник" наблюдавана съответно 23 и 25% от реципиентите. Рецидивите на остра левкемия до края на първата година след трансплантиране на пъпна връв клетки са открити в 26% от случаите.

[10], [11]