Кариотипиране

За изследването на хромозомите често се използват краткосрочни кръвни култури, както и клетки от костен мозък и фибробластни култури. Кръвта, доставена в лабораторията с антикоагулант, се подлага на центрофугиране за утаяване на червени кръвни клетки и левкоцитите се инкубират в хранителната среда в продължение на 2-3 дни. Фитохемаглутининът се добавя към кръвната проба, тъй като ускорява аглутинацията на еритроцитите и стимулира разделянето на лимфоцитите. Най-подходящата фаза за изследване на хромозомите е метафазата на митозата, така че колхицинът се използва за спиране на разделянето на лимфоцитите на този етап. Добавянето на това лекарство към културата води до увеличаване на дела на клетките, които са в метафаза, т.е. В този стадий на клетъчния цикъл, когато най-добре се наблюдават хромозомите. Всяка хромозома се реплицира (произвежда свое копие) и след подходящо оцветяване се вижда под формата на два хроматида, прикрепени към центъра или централната констрикция. След това клетките се третират с хипотоничен разтвор на натриев хлорид, фиксират се и се оцветяват.

За боядисване на хромозоми се използват по-често цвят Romanovsky-Giemsa, 2% ацетаминомин или 2% ацетазарин. Те оцветяват хромозомите изцяло, равномерно (рутинния метод) и могат да бъдат използвани за идентифициране на числени аномалии на човешки хромозоми.

За да се получи подробна картина на структурата на хромозомите, идентификация (идентификация) на отделните хромозоми или техните сегменти, се използват различни методи за диференциално оцветяване. Най-често използваните методи са Giemsa, както и G-и Q-огъване. Микроскопското изследване на лекарството по дължината на хромозомата разкрива серия от оцветени (хетерохроматин) и небоядисани (евхроматинови) ивици. Характерът на напречната ивица, получена в този случай, позволява да се идентифицират всяка хромозома в комплекта, тъй като редуването на ивиците и техните размери са строго индивидуални и постоянни за всяка двойка.

Метафазните плочи от отделни клетки са фотографирани. От снимките се изрязват отделни хромозоми и се поставят в листа хартия; такава картина на хромозомите се нарича кариотип.

Използването на допълнително оцветяване, както и нови методи за получаване на хромозомни препарати, които позволяват разтягане на дължината на хромозомите, значително повишават точността на цитогенетичната диагностика.

Специална номенклатура е разработена, за да опише човешкия кариотип. Нормалният кариотип на мъж и жена е означен като 46, XY и 46, XX, съответно. Когато синдром на Даун характеризира с наличието на допълнително хромозома 21 (тризомия 21), една жена описан като кариотип 47, XX 21+ и мъжете - 47, XY, 21+. При наличие на структурна аномалия на хромозомата е необходимо да се посочи променена дълга или къса ръка: буквата p означава кратко рамо, дълго рамо и транслокация. Така, когато краткото рамо на хромозома 5 (синдромът "котка-писък") се заличи, женският кариотип се описва като 46, XX, 5р-. Майката на дете с транслокация Синдром на Даун - носител на балансирано преместване от 14/21 има кариотип от 45, XX, t (14q, 21q). Транслокационната хромозома се формира при сливането на дългите ръце на хромозомите 14 и 21, късите рамене се изгубват.

Всяко рамо е разделено на областите, а те на свой ред - на сегменти, а тези и други са обозначени с арабски цифри. Центромерът на хромозомата е отправната точка за броенето на региони и сегменти.

По този начин се използват четири маркера за топографията на хромозомите: номер на хромозома, символ на рамото, номер на област и номер на сегмент в дадения регион. Например, 6p21.3 запис означава, че ние говорим за 6-ти двойка хромозоми, за краткото си ръката, площ 21, сегмент 3. Има повече допълнителни знаци, по-специално pter - края на късото рамо, qter - в края на дългата ръка.

Методът на цитогенетичното изследване позволява да се открият делеции и други промени в хромозомите само в размер на около 1 милион бази (нуклеотиди).

[1], [2], [3], [4]