Невронни стволови клетки

Експериментални данни за възможността за възстановяване на клетки на централната нервна система се получават много по-рано откриване на ембрионалното изследванията на стволови клетки, което показва наличието в неокортекса, хипокампуса и обонятелния на мозъчните клетки на възрастни плъхове, вълнуваща 3Н-тимидин, който е в състояние да синтезира протеин и делене. Обратно в 60-те години на миналия век се предполага, че тези клетки са предшественици на невроните и се включват директно в ученето и паметта. Малко по-късно показа присъствието на синапси образувани де ново в невроните и първата работа на използването на ембрионални стволови клетки за индуциране neyronogeneza ин витро. В края на експериментите XX век с насочена диференциацията на ЕСС в невронни прародителски клетки, допаминергични и серотонинергични неврони води до преразглеждане на класическите концепции на способността на нервните клетки на бозайници, за да се регенерира. Многобройни проучвания показват убедително как реалност реконструкции на невронните мрежи и наличието на neyronogeneza през целия период на следродилната организма на бозайник.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Източници на нервни стволови клетки

Невронни стволови клетки, изолирани по време на операции в субвентрикуларната зоната на страничните вентрикули и назъбения гирус на хипокампуса, което е в култура на клетките за образуване невросфери (нервни области), и след диспергиране и preformirovaniya миналото - всички основни клетъчни типове ЦНС или, в специална среда, новите микросферите. В суспензионни култури от дисоциирана тъкан, изолирани от мозъчни срезове фетални перивентрикуларна да възникне невросфери.

Маркери на незрели мозъчни клетки са нестин, бета-тубулин III (невронална маркер линия), виментин, GFAP и NCAM, за имуноцитохимичен идентификация на моноклонални антитела, които се използват. Нестинар (протеин от междинни тип IV неврофиламенти) експресира мултипотентни невроектодермални клетки. Този протеин се използва за идентифициране и изолиране на мултипотентни ЦНС невроепителен прогениторни клетки с моноклонални антитела на плъх-401, която може да открие до 95% от клетките на ембрионите на невралната тръба плъхове на единадесетия ден от бременността. Nestin не се експресира в диференцирана потомството на нервните стволови клетки, но присъства в началото на невронни клетки предшественици, пост-митотични неврони и началото neuroblasts. С помощта на този маркер се идентифицират невроепителни прогениторни клетки и се доказва съществуването на стволови клетки в централната нервна система. Виментин (междинно съединение неврофиламент протеин тип III) се експресира от нервни и глиални kletkami- прекурсори, както и неврони, фибробласти и гладкомускулни клетки. Следователно и двата имуноцитохимични маркера не притежават специфичността, необходима за отделната идентификация на нервните стволови и потомствени клетки. Използване на бета-III тубулин установи невронен произход стволови клетки, докато типа астроцити I са идентифицирани чрез експресията на GFAP и олигодендроцити експресира специфично galactocerebroside (Ga! С).

Митоген за невронни прародителски клетки са FGF2 и EGF, подпомага пролиферацията на прогениторни клетки в култура с образуването на невросфери. Разделяне невронни стволови клетки процент се увеличава значително повлияни от FGF2, и също така чрез използване на комбинация FGF2 + EGF. Пролиферативните ефекти на FGF2 се медиират от FGF2-R1 рецептори. Хепарин увеличава афинитета на свързване на FGF2 рецептора и драстично подобрява неговата митогенен ефект върху невроепителни клетки. В ранните етапи на ембриогенеза FGF2 рецептори, експресирани в теленцефалона плъх, в късните етапи на тяхната локализация ограничен вентрикуларна зона. Peak експресия FGF2-R1 пост-митотични клетки се наблюдава в края на периода на ранното неврогенезата. За първоначален период развитие теленцефалона характеризиращо се с ниска експресия на рецептора на EGF, предимно в клетки на вентралната региона. В по-късните етапи на ембриогенезата, експресия на EGF-R увеличава в посока дорзалната. В мозъка на гризач има висок афинитет EGF рецептор трансформира фактор бета растежа (TGF-бета-R), и които за предпочитане се свързва. Косвено функционалната роля на EGF-R посочва данни за кортикална дисгенезис преден мозък, възникващи в края на периода на ембриогенеза и постнатална онтогенията, функция понижаване на предния мозък, кора и ектопия смърт на хипокампални клетки от нокаут мишки ген EGF рецептор. Освен това, за образуването на невросфери абсолютно необходимо е наличието в културалната среда TGF-а. След отстраняване на растежни фактори от кондиционираната клетъчна среда стоп разделяне и претърпяват спонтанно диференциация да образуват неврони, астроцити и oligodendroblastov.

Предвид това, стволови клетки повторното агрегиране на дисоциирани невросфери и култивирането се провежда в културална среда, съдържаща EGF и основния FGF или FGF2, но без добавяне на серум. Показано е, че EGF индуцира пролиферация на стволови клетки subependimnoy зона на страничните вентрикули и основния FGF стимулира пролиферация на стволови клетки от стриатума, хипокампуса, неокортекса и зрителния нерв на зрелия мозък. Комбинацията на EGF и основния FGF е абсолютно задължително за активно пролиферация на стволови клетки, изолирани от епендимални трети и четвърти вентрикулите на предния мозък, както и на гръбначния канал на лумбалните и гръдни гръбначния мозък.

След спиране на дисоциация на нервните стволови клетки, култивирани в пластмасови съдове или мулти-ямкови плаки без лепило субстрат да се увеличи размера на нови невросфери оформени, което обикновено отнема около 3 седмици. Методът на множествена дисперсия и възпроизвеждане на невросфери позволява получаването на достатъчен брой линейни клони на мултипотентни стволови клетки за интрацеребрална трансплантация. Този принцип се основава и на създаването на банка от стволови клетки, изолирани от човешкия ембрионален мозък. Дългогодишното им клониране (в продължение на няколко години) прави възможно получаването на стабилни линии от нервни стволови клетки, от които се образуват катехоламинергични неврони по време на индуцираната диференциация.

Ако невросфери не се диспергира и се отглеждат на адхезивни субстрати в среда без растежните фактори, пролифериращи стволови клетки започне спонтанно да се диференцират до образуване невронни прекурсорни клетки и глиални клетки с експресията на маркери на всички видове нервни клетки: МАР2, Тау-1, NSE, Neun, бета тубулин III (неврони), GFAP (астроцити) и изчислено, 04 (олигодендроцити). Обратно, в култури на невронни стволови клетки в дела на неврони на повече от 40% от диференцираните клетки (при гризачи - от 1 до 5%) клетки при мишки и плъхове, но е много по-малко от олигодендроцити, което е много важно в клетъчната терапия гледна точка демиелинизираща заболявания. Проблемът се решава чрез добавянето на хранителна среда B104 че стимулира образуването mielinprodutsiruyuschih клетки.

Когато култивирани невронни стволови клетки от костен мозък на човешки ембриони в среда, съдържаща EGF, FGF основния и LIF, броят на линиите на невронни прародителски клетки повишаване на 10 милиона пъти. Възпроизведените in vitro клетки запазват способността си да мигрират и да се диференцират в нервни и глиални клетки след трансплантация в мозъка на полово зрели плъхове. Обаче, in vivo, броят на разделянията на мултипотентните прогениторни клетки е ограничен. Многократно се отбележи, че границата Hayflick за "възрастен" невронни стволови клетки (около 50 митоза) още недостижима дори в експеримента - клетките под формата на невросфери запазват своите свойства само за 7 месеца и само при 8 пасажи. Смята се, че това се дължи на методите на функции за тяхната дисперсия по време на пренасяне (трипсинизация или механично въздействие), който драстично намалява пролиферативна активност на клетките, поради нарушена междуклетъчни контакти. Наистина, ако вместо да се диспергира метод за разделяне на невросферите в 4 части, се използва значително жизнеспособността на клетките по време на преминаването. Тази техника позволява култивирането на човешки нервни стволови клетки за 300 дни. След този период обаче клетките губят митотичната активност и претърпяват дегенерация или стигат до стадий на спонтанна диференциация с образуването на неврони и астроцити. На тази основа авторът счита, че 30 митози са ограничаващият брой на разделенията за култивирани нервни стволови клетки.

При култивиране на човешки нервни стволови клетки in vitro се формират предимно GABA-ергични неврони. Без създаването на специални условия, невронни прародителски клетки пораждат допаминергични неврони (необходими за клетъчна терапия на болестта на Паркинсон) само в първите пасажи, след което всички неврони в култура се състоят предимно от GABA-ергични клетки. При гризачите индукцията на допаминергични неврони in vitro се предизвиква от IL-1 и IL-11, както и фрагменти от нервни клетъчни мембрани, LIF и GDNF. Въпреки това, този метод бе неуспешен за един човек. Независимо от това, с интрацеребрална GABA-ергична невронална трансплантация in vivo под влиянието на фактори на микросредата, се появяват нервни клетки с различни медиаторни фенотипове.

Търсене невротрофични фактори комбинации показват, че FGF2 и IL-1 индуцира допаминергични neuroblasts, които, обаче, не са в състояние да произвеждат допаминергични неврони. Диференциацията на стволови клетки в хипокампуса глутаматергичната възбуждащ и инхибиторни GABA-ергични неврони се влияе невротрофини, на EGF и IGF1 индуцира образуването на глутаматергичната и GABA-ергични неврони от невронни стволови клетки от човешки ембриони. Последователно добавяне на култура ретиноева киселина и невротрофин 3 (NT3) значително повишава диференцирането на стволови клетки от хипокампуса зрели мозък в неврони от различни медиатор характер, докато се използва комбинация от получен от мозък невротрофичен фактор (BNDF), NT3 и GDNF в култури от хипокампалната и неокортикален разположение пирамидални неврони.

Така, резултатите от многобройни проучвания показват, че, от една страна, стволовите клетки от различни мозъчни структури под влиянието на специфични фактори местните тъкан са способни на диференциране в виво в невронни фенотипове, присъщи на тези структури. Второ, насочена индуцирана диференциация на нервните стволови клетки ин витро чрез клониране прогениторни клетки дава възможност за получаване на невронални и глиални клетки с желаните характеристики фенотипни за интрацеребрално трансплантация в различни форми на мозъчната патология.

Няма съмнение, че плурипотентни стволови клетки, получени от ембриони или възрастен на централната нервна система, може да се разглежда като източник на нови неврони и се използва в клиниката за лечение на неврологични разстройства. Въпреки това, основната пречка за развитието на практически клетка Neurotransplantation е фактът, че по-голямата част от нервните стволови клетки не се диференцират в неврони след имплантацията в nonneural зряла област на ЦНС. В заобикаляйки това препятствие, тя предлага много оригинален иновативна техника, която позволява ин витро за получаване на чиста популация на неврони от плода невронни стволови клетки след трансплантация в централната нервна система на възрастни плъхове. Авторите смятат, че диференцирането на имплантираните клетки с този метод води до образуването на холинергичната невронна фенотип, поради влиянието на микросредата околните фактори. Предложената технология е от интерес по отношение на разработването на нови терапии, базирани на стволови клетки и замени повреден поради травма или невродегенеративни заболявания неврони като холинергични неврони играят водеща роля в развитието на двигателната функция, функцията на паметта и ученето. По-специално, холинергични неврони, получени от човешки ембрионални стволови клетки могат да бъдат използвани за заместване на моторни неврони загубени в амиотрофична латерална склероза или увреждане на гръбначния мозък. Понастоящем няма информация за методите за производство на значителен брой холинергични неврони от популация от стволови клетки, преформирани от митоген. Авторите предлагат доста прост, но ефективен начин за стимулиране митоген заготовки първични ембрионални невронни стволови клетки в посока на развитие в почти чисти неврони след имплантиране в nonneural и неврогенно CNS в зона за възрастни плъхове. Най-важният резултат на тяхната работа е превръщането на достатъчно голям брой на трансплантирани клетки в холинергични неврони когато имплантирани в средната мембрана и гръбначния мозък.

Освен това, за предварителното образуване невронни стволови клетки, мозъчни 8-седмични човешки ембрион holiyergicheskie неврони ин витро кортикална това предлага да се използват различни комбинации от следните трофични фактори и химикали: рекомбинантен основния FGF, EGF, LIF, амино-терминал на звука пептид мишка (Шшт-N ), транс-ретинолова киселина, NGF, BDNF, NT3, NT4, естествен мишка ламинин и хепарин. Първоначалната линия на човешки нервни стволови клетки (K048) се поддържа в продължение на две години витро и издържа 85 пасажи непроменени пролиферативни и диференциация свойства при запазване на нормална диплоидни кариотип. Недиспергирано невросфери 19-55 втори проходи (38-52 седмици д), засадени на поли-О-лизин и ламинин, и след това се обработва с горните фактори в различни концентрации, комбинации и последователности. Комбинация, състояща се от основен FGF, хепарин и ламинин (акроним FHL), дава уникален ефект. След един дни култивиране на ембриони невронни стволови клетки в среда с или без FHL Шшт-N (комбинация Шшт-N + FHL в съкращението SFHL) наблюдава бързо възпроизвеждащи големи плоски клетки. Всички други ден протокол (например като основен FGF + ламинин), обратно, да доведат до ограничен радиално разпространение на вретенообразни клетки, и тези клетки не оставят основните невросфери. След 6 дни на активиране и последващото десет диференциация средата, съдържаща B27, в края на FHL-активирани сфери polipolyarnye бяха открити големи невронни-подобни клетки. В друг протокол, повечето групи на невронни клетки са малки и биполярни или еднополюсен. Имуноцитохимичен анализ показва, че малки (<20 микрона) биполярно или монополярни клетки са или GABA-ергични или глутаматергичната има предвид, че най-големите polipolyarnyh клетки, разположени в края FHL-активирани невросфери доказали като холинергични експресирани маркери, характерни за холинергичните неврони (Остров-1 и ChAT). Някои от тези неврони в същото време, изразена синапсин 1. В резултат, пет серии от независими експеримента, авторите са установили, че общата популация на клетки в единични части от 45,5% диференцирани в неврони TuJl +, докато холинергичната (ChAT ^) неврони е само 27.8 % от клетките в същата популация. След още 10 дни на диференциация ин витро, в допълнение към холинергичните неврони в FHL-активирани невросфери бяха значителни количества от малки неврони - глутаматергичната (6,3%), GABA-ергични (11.3%), и астроцитите (35.2% ) и неинпозитивни клетки (18.9%). Когато се използват други комбинации от растежни фактори холинергични неврони отсъстват, и граничните клетки образувани невросфери или астроцити или незначително глутаматергичните и GABA-ергични неврони. Архивиране наблюдение и активни потенциал, използвайки техниката на цяла клетка пластир скоба показват, че след седем дни FHL активиращ polipolyarnyh голяма част от клетките имаха почивка потенциал представляващо -29.0 ± 2.0 тУ, в отсъствието на потенциал на действие. След 2 седмици почивка потенциални увеличения до -63.6 ± 3.0 тУ, които потенциали на действие се наблюдават по време на индукция деполяризиращ течения и 1М тетродотоксин блокирани, показващи, че функционалната активност на незрели холинергични неврони.

Освен това, авторите са установили, че самата или SFHL- активиране ин витро FHL- не води до образуването на зрели неврони, и се опитва да установи дали способен заготовки чрез FHL SFHL или стволовите клетки да се диференцират в холинергични неврони при трансплантирани в зрял плъх CNS. За инжектиране на активирани клетки в неврогенно област е проведено (хипокампус) и nonneural в няколко области, включително раздел префронтален кортекс Средната мембрана и гръбначния мозък на възрастни плъхове. Проследяването на имплантираните клетки се извършва с помощта на вектора CAO - ^ p. Известно е, че OCD етикети едновременно двете ултраструктура клетки и клетъчни процеси (молекулно ниво) без изтичане и податлив на директна визуализация. Освен това, OPP белязан невронни стволови клетки поддържат невронална профил и глиални диференциация идентичен профил нетрансформирани ембрионални стволови клетки на мозъка.

Една до две седмици след имплантиране на 5 х 10 ⁴ активирани и етикетирани невронни стволови клетки са намерени в гръбначния мозък или мозъка на плъхове, на ROC + клетките са основно в близост до мястото на инжектиране. Процесите на миграция и интеграция са наблюдавани вече един месец след трансплантацията. Миграцията диапазон варира в зависимост от мястото на инжектиране: частта въвеждане в префронталната кора OCD + клетки се намира в 0.4-2 мм от мястото на инжектиране, в случай на имплантиране в средната мембрана, хипокампуса, или гръбначния мозък клетки мигрират много по-големи Разстоянието -. 1-2 см присадени клетки са локализирани в централната нервна система високо структури, включително фронталната кора, средната мембрана, хипокампуса и гръбначния мозък. OCD маркираните невронни елементи са наблюдавани още през първата седмица след трансплантацията и броят им се увеличава значително 1 месец след операцията. Стереологичният анализ показва по-висока степен на оцеляване на имплантираните клетки в различни структури на мозъка, в сравнение с гръбначния.

Известно е, че съхранява регионално популация от стволови клетки, преобразуването в зрели клетки се регулира от специфични фактори тъкан в повечето тъкани на възрастни бозайници. Пролиферацията на стволови клетки, диференциране на прогениторни клетки и образуването специфични за структурата на мозъка невронални фенотипове ин виво до много по-голяма степен, изразена в ембрионален мозък, както е определено от наличието на високи концентрации на морфогенни фактори местно микросреда - невротрофини BDNF, NGF, NT3, NT4 / 5, и растеж FGF2 фактори, TGF-а, IGF-1, GNDF, PDGF.

Къде са нервните стволови клетки?

Установено е, че нервните стволови клетки експресират фибриларен протеин на глиалната киселина, който между зрелите клетки на нервната линия се запазва само върху астроцитите. Следователно, резервата на стъблото в зрялата централна нервна система може да бъде астроцитна клетка. Наистина, в обонятелния и назъбена извивка неврони са били идентифицирани, с произход от GFAP-позитивен прекурсор, което е в противоречие с традиционните възгледи за ролята на родоначалник на радиален нервна тъкан, GFAP не е изразено в назъбения гънка в зряла възраст. Възможно е в централната нервна система да има две популации от стволови клетки.

Въпросът за локализацията на стволовите клетки в субвентрикуларната зона остава неясен. Според някои автори, епендимални клетки образуват области в култура клонове, които не са верни невросфери (subependimy клетъчни клонове), тъй като само способността да се диференцират в астроцити. От друга страна, след флуоресцентни или вирусни епендимални клетките етикетиране маркер открити в клетки subependimnogo слой и обонятелни луковици. Такива белязани клетки in vitro образуват невросфери и се диференцират в неврони, астроцити и олигодендроцити. Освен това е показано, че около 5% ependyma клетки експресират маркери на стъблото - нестин, Notch-1 и Mussashi-1. Предполага се, че механизмът на асиметричен митоза, свързани с неравномерно разпределение на Notch-1 мембранен рецептор, при което последният остава на дъщерни клетки мембранни локализирани в епендималният зона, докато родителската клетка, мигриращ в subependimny слой губи този рецептор. От тази гледна точка, subependimnuyu зона може да се счита като колектор прогениторни невронални прекурсори и глиални клетки, получени от стволови епендималната слой. Според други автори, в опашната субвентрикуларната зона образува само глиални клетки и клетките са източник на neyronogeneza ростралния-латерална отдел. В трето изпълнение, предни и задни разделения субвентрикуларната зоната на страничните вентрикули предава неврогенно еквивалентна потентност.

За предпочитане изглежда четвърто изпълнение организация мозъчния резерв в централната нервна система, при което в зоната субвентрикуларната три основни видове невронни прогенитори - А, В и С. В първите клетки експресират невронални маркери (PSA-NCAM, TuJl) и заобиколени от В-клетки, които се идентифицират чрез експресията на антигени като астроцити. С-клетките, които не притежават антигенни характеристики на неврони или глия, имат висока пролиферативна активност. Авторът убедително доказа, че В клетките са предшественици на А-клетките и новообразуващите неврони на обонятелните луковици. По време на миграцията, А-клетките са заобиколени от нишки на невронни клетки предшественици, което значително се различава от механизма на пост-митотичен neuroblasts миграция по радиални глиални клетки в ембрионален мозък. Миграцията се прекратява в обонятелната луковица митотичен разделянето на А- и В-клетки, производни, които са включени в слоя от гранулозните клетки в гломерулна слой на обонятелни области на мозъка.

В развиващия се мозък на ембриони, които не се различава епендимални клетки и в камерите включват умножаване стволови клетки вентрикуларна germenativnoy та субвентрикуларната зона, които мигрират първичен невро и глиобластоми. Въз основа на това, някои автори смятат, че област subependimnaya зрял мозъка съдържа намален germenativnuyu ембрионални нервна тъкан, съставена от астроцитите, neuroblasts и неидентифицирани клетки. Истинските нервни стволови клетки представляват по-малко от 1% от клетките в херметичната зона на страничната камера на вентрикула. Отчасти поради тази причина, а също и във връзка с данните, които subependimnoy зона астроцитите са стволови клетки прекурсори невронни не изключват възможността за астроцитното на глиални трансдиференциация на клетките към придобиването на невронните фенотипните характеристики.

Основната пречка за окончателното решаване на проблема за локализирането на нервните стволови клетки in vivo е липсата на специфични маркери за тези клетки. Въпреки това, много интересно, от практическа гледна точка, представени доклади, които нервните стволови клетки се изолират от централната нервна система на отдели, които не съдържат subependimnyh зони - трети и четвърти стомахчета предния мозък, гръбначния канал торакалните и лумбалните гръбначния мозък. Особено важен е фактът, че за увреждане на гръбначния мозък повишена пролиферация на епендимални стволови клетки на централния канал с образуване на прогениторни клетки мигрират и диференциране в астроцити gliomezodermalnogo търбуха. В допълнение, прекурсорните клетки на астро- и олигодендроцити също се намират в интактния гръбначен мозък на възрастни плъхове.

По този начин, литературни данни силно показват наличието на централната нервна система на възрастни бозайници, включително хора, регионално стволови резерв, регенеративно и пластмаса с капацитет, за съжаление, е в състояние да осигури само физиологични регенериране процеси за образуване на нови невронни мрежи, но не отговарят на нуждите на репаративна регенерация. Това поставя проблема за намиране на начини за увеличаване на ресурсите на централната нервна система произтича екзогенна начин, че да не може да бъде решен без ясно разбиране на механизмите на формиране на централната нервна система по време на ембрионалното период.

Днес знаем, че в процеса на ембрионално развитие, стволовите клетки на тръбни клетки невронни са източник на три вида - неврони, астроцити и олигодендроцити, т.е., неврони и Невроглия клетки са получени от обща прекурсор. Диференциацията на ектодерма в клъстери на невронни клетки предшественици започва под влиянието на proneural гени bHLH група продукти и се блокира чрез експресия на трансмембранни рецептора протеинови производни Notch семейството на гени, които ограничават определяне и началото на диференциацията на нервните стволови клетки. На свой ред, Notch рецептор лиганди действат трансмембранни протеини Delta съседни клетки, дължащи се на извънклетъчния домен, които са пряк контакт клетка-клетка с индуктивен взаимодействие между стволови клетки.

По-нататъшното изпълнение на програмата за ембрионална неврогенеза е не по-малко сложно и, изглежда, трябва да бъде специфично за отделните видове. Въпреки това, резултатите neyroksenotransplantatsionnyh проучвания показват, че стволовите клетки имат различен еволюционен консервативност, така невронни стволови клетки са способни да мигрират и да се развива, когато се трансплантират в мозъка на плъх.

Известно е, че централната нервна система на бозайник има много нисък капацитет за репаративна регенерация, която се характеризира с липса на зрелия мозък признаци на нови клетки на мястото на мъртви клетки в резултат на невронално увреждане. В случая на невробластична трансплантация, обаче, те не само оцеляват, пролиферират и диференцират, но също така могат да бъдат интегрирани в мозъчните структури и функционално да заменят загубените неврони. Когато свързаните невронни прогениторни клетки се трансплантират, терапевтичният ефект е значително по-слаб. Такива клетки показват нисък капацитет за миграция. В допълнение, невронните прогениторни клетки не възпроизвеждат архитектурата на невронните мрежи и функционално не се интегрират в мозъка на получателя. Във връзка с това проблемите на възстановяващото пластмасово регенериране се изследват активно при трансплантацията на неформени многопотенциални нервни стволови клетки.

Проучване М. Александрова сътр В (2001) в първото изпълнение, експерименти са реципиенти на зрели женски плъхове и донори бяха ембрионалното развитие 15 дни. Реципиентите се отделят част от тилната кортекс и кухината трансплантиран механично суспендира предполагаем ембрионален кортикална тъкан, съдържаща мултипотентни стволови клетки вентрикуларна и субвентрикуларната област. Във второто изпълнение, експерименти, извършени трансплантация на нервните стволови клетки от 9-седмични човешки ембрионални плъхове мозъка polovozrelh. От перивентрикуларните ембриони площ авторите на филийки изолиран в мозъчната тъкан се поставят в тяхната културална среда и F-12 се получава чрез повторно пипетиране на клетъчната суспензия, и след това се култивират в специална среда NPBM допълнена с растежни фактори - FGF, EGF и NGF. Клетките се култивират в суспензионна култура преди образуването на невросфери, които са диспергирани и се утаява отново в културата. След 4 пасажа с общ период на култивиране 12-16 дни, клетките се използват за трансплантация. Получатели са desyatisutochkye зрели плъхове и двумесечни плъхове Wistar, които в областта на латералния вентрикул се инжектират с 4 мкл суспензия от човешки нервни стволови клетки без имуносупресия. Резултатите показват, че клетките се дисоциират вентрикуларна и субвентрикуларната зона на ембрионални мозъчната кора маркер плъх алографта при възрастни мозъка продължава да се развива, т.е. Фактори диференцирани получател микросреда на мозъка не блокира растежа и диференциацията на нервните стволови клетки на ембрион. В началото на периода след трансплантацията на мултипотентни клетки продължава митотично делене и активно мигрират от областта на трансплантацията тъкан в мозъка получател. Трансплантирани ембрионални стволови клетки, които имат по-голям потенциал за миграция, са били открити в почти всички слоеве на кората на главния мозък на трансплантацията на костен мозък получател по пистата и в бялото вещество. Дължината на пътя на миграция на нервните клетки винаги е била значително по-ниски (до 680 микрона) в глиални клетки (до 3 mm). Структурните вектори за мигриращи астроцити са кръвоносните съдове и влакнести структури на мозъка, които също се наблюдава при други изследвания.

Преди се е смятало, че натрупването на белязани астроцити в кората на зоната получател на увреждане на мозъка може да бъде свързана с образуването на глиални бариера между тъканен трансплантант и получателя. Въпреки това, изследване на структурата на компактно разположените клетъчни присадки показа, че тяхната цитохрхеректоника се характеризира с случайност, без каквото и да е слоево разпределение на трансплантираните клетки. Степента на подреждане на трансплантираните неврони се доближава до тази на клетките на нормалната церебрална кора, само ако няма глиална бариера между тъканите на донора и реципиента. В противен случай структурата на клетките на трансплантацията е нетипична, а самите неврони са претърпели хипертрофия. Невромунохимичното типизиране на трансплантирани клетки в трансплантации показва инхибиторни GABA-ергични неврони, за да се открие експресията на протеини PARV, CALB и NPY. Следователно, в зрелия мозък, фактори на микросредата, които могат да поддържат пролиферацията, миграцията и специфичната диференциация на нервните многопотентни клетки, продължават да съществуват.

В културата на човешки стволови клетки, изолирани от мозък перивентрикуларните 9-седмични ембриони, М. Александрова и сътр (2001) в четвъртия преминаването nestinpozitivnyh намерено голям брой мултипотентни клетки, някои от които са били подложени на диференциация ин витро и разработени от невронална тип, което отговаря резултати от изследвания от други автори. След трансплантация в мозъка на възрастни плъхове култивирани човешки стволови клетки митотично разделен и мигрират в тъканта на хетероложен мозък реципиент. При клетъчните трансплантации, авторите наблюдават две популации клетки - малки и по-големи. Последно мигрирали в паренхима и в структурите на влакна в мозъка на малко разстояние получател - до 300 микрона. Най-дългият път на миграция (до 3 мм) е характеристика на малките клетки, някои от които са диференцирани в астроцити, установени с помощта на моноклонални антитела за GFAP. Не са открити двата вида клетки в стената на латералния вентрикул, показвайки, че на изхода на трансплантираните клетки в ростралния миграционен поток. Астроцитен получен невронни стволови клетки от човешки и плъши мигрирали предимно чрез кръвни капиляри и структури влакна получател мозъка, която съвпада с данните на други автори.

Анализът на диференциацията на човешки стволови клетки in vivo, използвайки моноклонални антитела към GFAP, CALB и VIM, показва образуването както на астроцити, така и на неврони. За разлика от клетките на присадки от плъхове, много човешки стволови клетки бяха позитивни на виментин. Следователно, част от човешките мултипотентни клетки не е диференцирана. По-късно, същите автори показват, че човешки нервни стволови клетки бяха трансплантирани без прилагане на имуносупресия след подлагане трансплантация в мозъка на плъх в продължение на 20 дни без данни за имунната агресия от глиални клетки на зрелия мозъка.

Установено е, че дори и невронни стволови клетки от Drosophila prizhivlyayutsya и се подлагат на диференциация в мозъка е толкова отдалечен от таксони насекоми, като плъх. Правилността на авторите на експеримента не е под съмнение: трансгенните Drosophila линии, съдържащи гени на човешки невротрофични фактори NGF, GDNF, BDNF, се вмъква във вектора под Casper Drosophila: Трябва шок промотор, така че температурата на тялото на бозайник автоматично призовава тяхната експресия. Авторите определени клетки продукта ген бактериална галактозидаза на Drosophila от хистохимично X-Gal оцветяване. Освен това се оказа, че нервните стволови клетки са Drosophila специфично реагира на невротрофични фактори, кодирана от човешки гени: ксенотрансплантационния на клетки на трансгенни линии на Drosophila съдържащи GDNF ген в диференциране невронни стволови клетки драстично повишен синтез на тирозин хидроксилаза, и ген NGF клетки активно произведени ацетилхолинестераза , Подобна реакция genzavisimye индуцира в ксенотрансплант трансплантирания алографт с него ембрионален нервна тъкан.

Означава ли това, че специфичната диференциация на нервните стволови клетки се индуцира от специфични за вирона невротрофични фактори? Според резултатите автори ксенотрансплантат производителки невротрофични фактори имат специфичен ефект върху съдбата на алографти, които след това по-интензивно, разработени и е 2-3 пъти по-голям от размера на алографти, вписани в мозъка без добавяне на ксеноприсадки. Следователно ксенографт клетки, съдържащи невротрофин гени, особено на гена, кодиращ глиално-производен неуротрофичен фактор (GDNF) човешки упражняват върху развитието на алографт vidonespetsifichesky ефект, подобен на действието на съответния невротрофин. Известно е, че GDNF увеличи оцеляването на допаминергични неврони в ембрионален средния мозък на плъх и повишава метаболизма на допамин от тези клетки и индуцира диференциация на тирозин хидроксилаза позитивни клетки, повишаване на растежа на аксони и неврони увеличаване размера на тялото. Подобни ефекти се наблюдават в културата на допаминергичните неврони в средата на мозъка на плъхове.

След ксенотрансплантацията на човешки нервни стволови клетки в мозъка на зрели плъхове, се отбелязва тяхната активна миграция. Известно е, че процесът на миграция и диференциация на нервните стволови клетки се контролира от набор от специални гени. Започване сигнал мигриращи прогениторни клетки до върха на диференциация дава протеинов продукт на прото-онкоген с-задържане заедно GDNF. Следващият сигнал идва от генната каша-1, която контролира избора на пътя на развитието на клетките. В допълнение, специфичната реакция на диференциращите клетки също зависи от а-рецептора на цилиарния невротрофичен фактор. По този начин, като се има напълно различни генетични конституция ксеногенни човешки невронни стволови клетки и мозъчните клетки реципиент плъх, трябва да се признае не само vidonespetsifichnost невротрофични фактори, но също и най-високата еволюционен опазването на гени, отговорни за специфичното диференциация на нервните стволови клетки.

Ще се види възможно ксенотрансплантация ембрионален neyromateriala в неврохирургическа практика лечение на невродегенеративни патологични процеси, поради нарушена синтеза на миелин олигодендроцитен. В същото време, най-интензивно Neurotransplantation адрес въпросите, свързани с получаване на ембрионални или зрели алогенна мозък нервни стем клетки в култура, последвано от тяхното насочено диференциация в neuroblasts или специализирани неврони.

Трансплантация на нервни стволови клетки

За стимулиране на пролиферацията и диференциацията на нервните стволови клетки от възрастен организъм могат да бъдат трансплантирани ембрионален нервна тъкан. Не е изключено, че въведен от алографт със стволови клетки в нервната тъкан на самия ембрион може да претърпи пролиферация и диференциация. Известно е, че след нараняване на гръбначен мозък регенериране на извършени чрез удължаване на увредените аксони и аксонална нервните проводници покълване обезпечение покълване на моторни неврони непокътнати. Основните пречки за регенериране на гръбначния мозък, са образуването на съединителна увреждане на тъканите в областта на белег, дистрофични и дегенеративни промени в централните неврони, NGF дефицит, и присъствието на миелин разпадни продукти засегнатата област. Показано е, че трансплантация в ранен гръбначния мозък на различни клетъчни типове - фрагментите на седалищния нерв на възрастни животни, ембрионален тилната кора, хипокампуса, гръбначния мозък, Schwann клетки, астроцити, микроглия, макрофаги, фибробласти - допринася за възстановяването на увредени аксони от покълване и позволява новообразуваните аксоните растат през площ на увреждане на гръбначния мозък. Експериментално е доказано, че трансплантация на зародишен нервната тъкан на нараняване на гръбначен мозък чрез действието на невротрофични фактори ускорява растежа на засегнатите аксоните, предотвратява образуването на глиални белези и дистрофични развитие и дегенеративни процеси в централните неврони, докато клетки, трансплантирани ембрионален нервна тъкан, подложени на гръбначния мозък, интегрират със съседните тъкани и предизвиква аксонално покълване чрез засегнатата област с образуването на синапси DEN driticheskogo вид на гръбначния неврони.

Тази област на регенеративната медицина и пластична получи най-голямото развитие в Украйна се дължи на работата на научния екип начело с VI Tsymbalyuk. На първо място, това експериментално изследване на ефективността на трансплантация на ембрионалното нервна тъкан от нараняване на гръбначния мозък. В автоложни периферни нервни най-изразени промени разрушителни авторите наблюдават отдалечен район уплътнение, където 30-ия ден след операцията те се смесват с естеството на репарационните процеси. Когато алографт morphofunctional състояние на имплантирани нерв на 30-ия ден се характеризира с тежка разграждане на явленията на мастна дегенерация и амилоидоза в фон фокална възпалителна инфилтрация limfoidnokletochnoy на с преобладаващ атрофия на Schwann клетки. Трансплантация на ембрионалното нервна тъкан допринесе до голяма степен на възстановяване на проводимост на гръбначния мозък, особено в животни, които операция се провежда в първите 24 часа след нараняване: срещу облекчаване на възпалителни разрушаване процеси маркиран хипертрофия и хиперплазия на синтеза на протеини и energoprodutsiruyuschih ултраструктурни елементи гръбначния неврони хипертрофия и олигодендроцити хиперплазия, 50% намаляване на амплитудата на потенциала на действие на мускулите и 90% - скорост задържащ импулс. При оценяване на ефективността на трансплантация на тъкан трансплантация на плода невронни зависимост от зоната е установено, че най-добри резултати се наблюдават, когато се прилага директно в областта на трансплантацията на увреждане на гръбначния мозък. При пълно преминаване на гръбначния мозък на трансплантация фетален нервна тъкан се оказа неефективно. Динамични проучвания показват, че оптималното време за трансплантация на ембрионалното нервна тъкан са първите 24 часа след увреждане на гръбначния мозък, докато операция по време на периода на изразени вторични исхемични и възпалителни промени, настъпващи в 2-9-ия ден след травмата, трябва да се признае непрактично.

Известно е, че тежка черепномозъчна травма предизвиква силно и продължително активиране на липидната пероксидация в началните и междинните етапи на пост-травматичен период в увредената мозъчна тъкан и в целия организъм, а също така дава енергийния метаболизъм в увреденото мозъка. При тези условия присаждане на зародишен нервна тъкан на травматично увреждане допринася за стабилизирането на процесите на липидната пероксидация и увеличава капацитета на антиоксидант система на мозъка и на целия организъм, увеличава антирадикал защита на 35-60-ия ден посттравматичен период. В същото време след трансплантацията на ембрионална нервна тъкан се нормализира енергийният метаболизъм и оксидативното фосфорилиране в мозъка. Освен това е показано, че на първия ден след експериментално травматично мозъчно полукълбо ранени тъкан импеданс намалява с 30-37% от контралатералната - 20%, което показва развитието на генерализирано мозъчен оток. При животни, които са били подложени на трансплантация на нервната тъкан оток инволюция на плода се случва много по-бързо - вече на седмия ден от средната стойност на съпротивлението на тъканите травматизирани полукълбо достигна 97.8% от нивото на контрол. Освен това пълното възстановяване на стойностите на импеданса на 30-ия ден се отбелязва само при животни, на които е трансплантирана ембрионалната нервна тъкан.

Смъртта на невроните в мозъка след тежък травматично увреждане на мозъка е с голям принос за развитието на посттравматични усложнения. Особено податливи на неврони наранявания интегрират допаменергичната и норадреналин системи, средния мозък и гръбначен мозък. Намаляване на нивата на допамин в striopallidarnoy комплекс и мозъчната кора значително увеличава риска от двигателни разстройства и психиатрични разстройства, епилептиформени състояния, и намаляване на производството на допамин в хипоталамуса може да бъде причина за многобройни автономни и соматични смущения, наблюдавани в далечна посттравматичен период. Резултатите от проучвания при експериментални травматично увреждане на мозъка показват, че трансплантацията на плода нервна тъкан допринася за възстановяването на допамин в увреденото полукълбо на мозъка, допамин и норепинефрин - в хипоталамуса, както и повишаване на нивата на норадреналин и допамин в средния мозък и гръбначен мозък. Освен това, в резултат на трансплантация на ембрионалното нервна тъкан в животински модели на мозъка ранени полукълбо нормализирана процент от фосфолипиди и повишено съдържание на мастна киселина (С16: 0, С17: 0, С17: 1, 18: 0, 18: 1 + 18: 2, С20 : 3 + С20: 4, С20: 5).

Тези данни потвърждават стимулирането на процесите на регенеративна плазма чрез трансплантирана ембрионална нервна тъкан и показват репаративен трофичен ефект на присадката върху мозъка на реципиента като цяло.

Специално внимание трябва да се обърне на клиничния опит на персонала на Института по неврохирургия. AP Romodanov академия на медицинските науки на Украйна за трансплантация на ембрионални нервна тъкан в детска церебрална парализа - много сложна болест с груби нарушения на двигателната функция. Клиничните форми на детска церебрална парализа зависят от нивото на увреждане на интегралните структури, отговорни за регулирането на мускулния тонус и формирането на моторни стереотипи. В момента има достатъчно доказателства, които предполагат, че нарушенията на двигателната функция и мускулния тонус са важни патологични промени в striopallido-thalamocortical контрол на двигателя система. Стрипоспалидната връзка на тази система упражнява контролна функция чрез нигропространственото производство на допамин. Директен път започва прилагането на контрол на thalamocortical неврони обвивка медиирана gammaaminomaslyanoy киселина (GABA) и субстанция Р и очаква директно в зоната на двигателя на вътрешния сегмент на Глобус палидус и субстанция нигра. Непряко пътека, чието действие се осъществява с участието на GABA и енкефалин, произхожда от неврони черупката и засяга сърцевината на базалните ганглии чрез последователност връзка, включващ външен сегмент на Глобус палидус и субталамичното ядро. Нарушенията в проводимостта на директния път причиняват хипокинезия, докато намаляването на проводимостта на структурите на непрекия път води до хиперкинезия със съответни промени в мускулния тонус. Целостта на ОАВАергични пътища на различни нива в системата на управление на двигателя и интеграция на допаминергични връзки до нивото на черупки са от съществено значение за регулирането на thalamocortical взаимодействия. Най-честата проява на двигателната патология при различни форми на детска церебрална парализа е нарушение на мускулния тонус и тясно свързана промяна в рефлекторната активност на мускулите.

Трансплантацията на ембрионална нервна тъкан при детската церебрална парализа изисква внимателен анализ на естеството на увреждането на мозъчните структури. Въз основа на определянето на допамин и GABA в субарахиноидното цереброспинална течност е Авторите са подробно степента на интеграция на функционални нарушения на мозъчните структури, които позволяват да се обективира резултатите от хирургическа намеса и да се коригира повтори Neurotransplantation. Фетален нервна тъкан (abortny материал 9 седмици ембрион) бяха трансплантирани в паренхима на кора прецентрални части гирус на мозъчните полукълба, в зависимост от тежестта на атрофични изменения. В постоперативния период не са наблюдавани усложнения или влошаване на пациентите. Положителна динамика се наблюдава при 63% от пациентите с еластични форми, 82% от децата с понижен тонус-естетичен вид и само в 24% от пациентите със заболяване на ставите. Открит е отрицателен ефект върху резултатите от действието на високо ниво на неврочувствителност при наличие на автоантитела към невроспецифични белтъци. Неефективно трансплантация на ембрионални нервна тъкан се появи при пациенти на възраст 8-10 години и по-възрастни, както и при пациенти с тежко хиперкинетично синдром и episindroma. Клинична ефикасност на трансплантация на ембрионалното нервна тъкан при пациенти с еластични форми на церебрална парализа проявява statomotornyh образуването на нови умения и волевите движения с коригиране на патологичните модели движение и намаляване на степента на еластичност, необичайни пози и нагласи. Авторите смятат, че положителният ефект от трансплантация на ембрионални нервна тъкан е резултат от ефекта на нормализиране на функционалната активност на супраспиналните структури, участващи в регулацията на тона на пози и волевите движения. В този случай, положителните клинични ефекти на трансплантация на ембрионалното нервна тъкан са придружени от намаляване на съдържанието на невротрансмитери в субарахноидален цереброспиналната течност, което показва, че възстановяване интегрални взаимодействия засегнатите мозъчни структури.

Има още един тежки форми на неврологично заболяване - минимално съзнание състояние, проблемът за лечението на които, за съжаление, далеч не е решен. Представлява минимално съзнание състояние polyetiology субакутен или хронично състояние, в резултат на тежки органични лезии на централната нервна система (главно кора), и се характеризира с развитието и panapraksii panagnozii при относително съхраняват функция сегментни секции стволови образувания и лимбичната мозъка ретикуларната комплекс. Последващи проучвания (1 до 3 години) показват, че минимално съзнание състояние не е окончателно диагностициране на персистираща увреждане на нервната система при деца, и се превръща в органичен или деменция, или хронично вегетативно състояние. В катедра "Рехабилитационна неврохирургия" на Института по неврохирургия. AP Romodanov науките на Украйна 21 пациенти с последствия apallic синдром трансплантация на ембрионалното нервна тъкан се провежда. Под обща анестезия корона режещото брус дупка се прилага на площ от най-изразени атрофични промени, идентифицирани в компютър или магнитен резонанс на, и в присъствието на дифузна атрофия на сиво или бяло вещество се въвежда в присадката и централна прецентрални части гирус на мозъка. След отваряне на външната обвивка на парчета 8-9 седмици тъканни Bookmarks стар ембрионални сензомоторна кора intracortical имплантирани с помощта на специално устройство. Броят на пробите на имплантирани тъкан е от 4 до 10, който се определя от количеството и размера на брус отвор локални промени мозък. За разлика от други видове патология при apallic синдром, авторите се опитват да се имплантира, тъй като много фетална тъкан в най-достъпни области на мозъка. Трайната материя беше зашита, пластиката на дефекта на черепа беше направена. По време на операцията, всички пациенти са показали значителни промени както кората на главния мозък (атрофия, липса на извивки, обезцветяване и пулсация кора) и мозъчните обвивки (удебеляване на твърдата мозъчна обвивка, значително удебеляване на аракноидните мембрана, като се има собствен кръвоносните съдове, фюжън черупки с основното мозъчно вещество). Тези промени са по-силно изразени при пациенти с анамнеза има индикации за прехвърлените възпалителни мозъчни лезии. При пациенти, които са подложени на хипоксия CNS, контролирани от дифузни атрофични изменения на мозъка вещество, особено кортикални отдели, с увеличаване на субарахноидалното пространство, без значителни промени в мембрани на мозъка. Половината от пациентите са показали повишено кървене на меки тъкани, кости, мозъчно вещество. След операции в периода от шест месеца до три години състоянието се подобри при 16 пациенти, като пет пациента останаха непроменени. Положителна динамика се наблюдава както от страна на двигателя, така и от психичната сфера. Мускулна тон се намалява в десет пациенти и физическа активност на пациента се увеличава (намалява пареза, подобряване на координацията на движенията), на манипулативни способността на горните крайници значително увеличен в пет деца. Четирима пациенти намаляват честотата и тежестта на епилептични припадъци и едно дете за целия период на наблюдение от гърчове след операция не съществува. Агресивността е намалял в две деца при двама пациенти с тежко увреждане булбарна подобрено преглъщане, две деца са били в състояние да се дъвчат сами по себе си в рамките на 2 седмици след операцията. В него се отбелязва намаляване на тежестта на психични разстройства, девет деца след операцията се повече спокойствие, сън и внимание подобрена в седем пациенти. Трима пациенти с последици apallic синдром започнаха да се признае на родителите си, един - да следвате инструкциите, два - да каже думите, три са намалели степен на дизартрия. Авторите отбелязват, че значително подобрение при пациенти започва след 2 месеца след операцията, достига максимум 5-6 месеца, а след това скоростта на подобрение се забавя и в края на годината, 50% от пациентите в процеса на стабилизиране. Положителен ефект neurotransplantation служи като основа за reoperation в шест пациенти с последици apallic синдром, но от друга полукълбо на мозъка. Техники и втори методология трансплантация са идентични с тези на първата операция, но клиничният ефект на втория етап е по-ниска, въпреки че това не стане, след първата и след втората операция сериозни усложнения. Според авторите, терапевтичното механизъм на действие, свързано с neurotransplantation невротрофичен влияние трансплантиран ембрионален нервна тъкан, която съдържа голямо количество растеж, хормонални и други биологично активни вещества насърчаване ремонт на повредени неврони и пластмаса реорганизация мозък реципиент тъкан. Не е изключено и активиращ ефект върху активността на нервните клетки, които са запазени морфологично, но губи поради функционалната активност на заболяването. Той е бърз невротрофичен ефект може да се обясни с подобряването на функциите мехурчестия в някои деца в края на първата или втората седмица след операцията. Предполага се, че в допълнение към тези, на третия и четвъртия месец между присадката и домакин мозъка са установени морфо-функционална комуникация, чрез които neyrotransplantat замества функцията на мъртви мозъчни клетки, което е основата за подобряване на двигателните, така и умствени функции на пациентите.

Трансплантация Ефект фетален нервна тъкан за оздравяване interneuronal връзки проучен експериментално. Авторите на бели плъхове с помощта липофилен флуоресцентни маркери ДИЛ (1,1-диоктадецил-3,3,3 \ 3'-tetrametilindokarbotsianina перхлорат) и конфокални модели лазерно сканиране проучен възстановяване intermodule аксонални връзки в зоната на механично увреждане на мозъчната кора на ембрионален произход трансплантация нервна тъкан и без нея. Той установява, че въвеждането на зародишен нервна тъкан в увредената област осигурява растеж на аксон, който след преминаване през присадката са свързани към съседната мозъчната тъкан, докато без трансплантация на тъканно увреждане зона на плода невронни е за отглеждане на аксони непреодолимо препятствие. В тази работа, трансплантация на ембрионални (15-17-ти ден на бременността) неокортекса. Нашите резултати - допълнителни доказателства в подкрепа на активно влияние ембрионален присадка нервна тъкан на пост-травматичен реорганизация interneuronal връзката съседни структурни и функционални модули на кората на главния мозък. Трансплантация на ембрионалното нервна тъкан осигурява частично възстановяване на отношенията между разделените части на увреждане на мозъчната кора чрез създаване на благоприятни условия за растеж на аксони в зоната на фактори присадката neyrotrofichoskih. Наличието на такъв ефект е доказано експериментално и обсъдени в литературата като доказателство за високи възможности пластмасови на повреден мозъка на възрастни животни. В тази връзка, клетъчна трансплантация сега се счита за оптимална терапевтична стратегия за възстановяване функцията на увредена човешки CNS.

Нашите данни за ефективността на фетален мозък нервна тъкан като екзогенни среда трансплантация за аксонални перспективи за растеж свидетелстват целенасочено създаване на комуникационните връзки между съседните незасегнати части на мозъка. Край на работа се появява за проучване на ефекта на трансплантация на нервната тъкан на динамиката на ЦНС функционални параметри, чиято задача е да се изследва влиянието на трансплантацията на фетални Маркери локус coeruleus (LC) на morphofunctional индикатори LC неврони и получателите локомоторната активност. Получателите са били женски плъхове Wistar, донори - 18-дневни ембриони на плъхове от същата линия. Трансплантацията на ембрионален LC се извършва в кухината на третата камера на мозъка. Хистологично се открива присаждане на трансплантат при 75% от реципиентите. В случаи на присаждане се намира на стената на камера, за да запълни една / 5-2 / 5 от неговите лумена, и е изгодно. След 1 и 6 месеца след операцията, трансплантирания нервна тъкан морфологична характеристика е структурата, която ще се случи, когато нормалната онтогенетичната развитието, което е структурата на LC. Нашите данни показват, че в животни, които са трансплантирани фетален раздела LC варира динамична активност и повишена активност на матрица LC клетъчните ядра хроматин. Следователно, интензифицирането на активността на невроните на собствения LC се извършва, но имплантовата присадка също е функционално активна. Известно е, че така наречената локомоторна област на средния мозък практически съвпада с локализирането на LC. Авторите смятат, че на базата на промени в двигателна активност на плъховете реципиенти е активирането на LC клетки, както собствена и присадката, с разпределение в резултат на големи количества норепинефрин, включително сегменти на гръбначния мозък. По този начин, се приема, че увеличаването на локомоторната активност в условия трансплантация LC в интактно мозък на животните, поради наличието на функционално активен трансплантация интегриран с мозъка на получателя и допринася за активирането на локомоторната активност на плъховете.

Освен това е показано, че трансплантиран ембрионален невроепителни клетки маркери неокортекса и гръбначния мозък оцелеят и да се диференцират в neuroblasts, млади и зрели неврони в рамките на 1-2 месеца след трансплантацията в увреденото седалищния нерв на възрастни плъхове. В изследването на динамиката на NADRN положителни неврони маркери ембрионални гръбначния мозък и неокортекса плъх хетеротопни алографти (15 плъх ембрионални дневно) за надлъжни разрези през седалищните нервите на плъхове-реципиенти показват присаждане от 70 до 80% neyrotransplantatov че зависи от времето на наблюдение. Neuroblasts едно- и биполярно форма със заоблени светли ядра и един или два нуклеоли започват да се образуват в присадки на една седмица след операцията, което е съпроводено с образуването на клъстери. Сред neuroblasts автори не успяха да открие клетки, съдържащи NADPH-diafopazy (NADPH-г). След 7 дни на NADPH-позитивни са само клетъчни елементи на кръвоносните съдове - ендотелни клетки на капилярите в интериора на присадката и ендотелни и съдови гладкомускулни клетки на седалищния нерв на получателя. Тъй като в съдови гладкомускулни клетки, индуциране на NO-синтаза (NOS) се появява под влияние на IL-1, авторите отдават появата на NADPH-позитивни гладкомускулни клетки в кръвоносните съдове на седалищния нерв на присъствието на IL-1, синтезирано в увредените нервни стволове. Известно е, че в условия neyronogenez трансплантация на фетални мозъчни маркери е синхронизирано с развитието на неврони ин ситу. Резултатите от морфологичните изследвания предполагат, че диференцирането на нервните елементи трансплантация седем дни след трансплантацията съответства на клетъчна диференциация, подобен на мозъка на новородени плъхове. Така, в хетеротопна трансплантация в периферните нерви трансплантиран ембриони нервните клетки проявяват способността да синтезира NADPH-г. В гръбначния мозък трансплантация разкрива повече неврони, съдържащи NADPH-г, присадки, отколкото в неокортекса, но синтеза на азотен оксид в трансплантирани неврони започва по-късно от развитието на място. В гръбначно централната нервна система NOS-позитивни клетки показват най-рано на пренатална период. Смята се, че NO допринася за образуването на синаптичните връзки в развиващия мозъка, и присъствието на NOS-позитивни нервни окончания, предоставящи neuroblasts NO синтез в малкия мозък, стимулира миграцията и диференциацията на неврони, при което се образува Cytoarchitectonics нормален мозък. Важната роля на NO в sinapsogeneze инсталиран в тектума - NOS-положителни неврони са само тези, които са синаптичните връзки с ретинални клетки.

Известно е, че азотният оксид е един от регулаторите на мозъчната активност, където се образува от аргинин под влиянието на NO синтетаза, която има диафорална активност. В ЦНС, N0 се синтезира в ендотелните клетки на кръвоносните съдове, микроглита, астроцитите и в невроните на различни части на мозъка. След травматично мозъчно увреждане, както и хипоксия и исхемия, има увеличение в броя на невроните, съдържащи NO, което е един от регулаторите на церебралния кръвен поток. Предвид способността на NO да индуцира синапсогенеза, изследването на образуването на NO-съдържащи клетки при състояния на невротрансплантация на фона на травматични наранявания на нервната тъкан на реципиента е от особен интерес.

Не по-малко важно е изследването на ефекта от невротрансплантацията върху усложнения рефлексен стереотип на поведението. В експерименти, изучаващи влиянието на далечен и интрацеребрално (между СИ и CIII) присадки на ембрионални синкави петна (17-19-ия ден на бременността) и съдържанието на паметта на катехоламини процеси в плъхове с унищожаване фронтотемпорална неокортекса показано, че електролитно увреждане фронтотемпорална кора дава стереотип условно емоционална реакция избягване рефлекс (памет), намалява физиологичната активност, намалява количеството на норадреналин в корови зона на коагулиран но увеличава така си ниво в хипоталамуса, когато намаляването на концентрацията на адреналин, но в кръвта и надбъбречните жлези количеството му се увеличава.

В резултат на интрацеребрално трансплантация на ембрионална тъкан синкави петна в 81.4% от животните възстановени стереотип отговор условно избягване емоционална рефлекс, нарушен електролитен увреждане на челно-темпорална области на кората на главния мозък нормализирана адреналин в средния мозък ретикуларната формация, хипоталамуса и неокортекса и хипокампуса дори повишава ниво, в комбинация с намаляване на кръвните концентрации на адреналин.

Distant трансплантация на ембрионални тъкани синкави петна популяризира не само възстановяване на увредена стереотип условен отговор на отбягването емоционален рефлекс при плъхове с лезии на електролитна темпоралната кора, но също така увеличава съдържанието на норадреналин и адреналин, най-вече в хипоталамуса, кръвта, сърцето и надбъбречните жлези. Предполага се, че това се дължи на присади васкуларизация, проникване на невротрансмитери в кръвния поток, тяхното преминаване през адреналин кръвно-мозъчната бариера и активиране механизми повторно поемане и поглъщане на норадреналин от типове 1, 2, 3. Авторите смятат, че стабилизирането на дълги норадреналинови нива в присаждане и функция присаждане може да се разглежда като феномен на постепенното освобождаване на неврони в минимални дози синкави петна.

Положителни клиничните ефекти на трансплантация на ембрионалното нервна тъкан може да се дължи на способността и последния влиянието на процесите на образуване на нови съдове в регулирането на пряко участие на растежни фактори и цитокини. Активният васкулогенеза ангиогенни растежни фактори - съдов ендотелен растежен фактор (VEGF), FGF, PDGF, и TGF, които са синтезирани по време на исхемия служи точката на произход на ангиогенеза. Доказано е, че изчерпването на съдовия растеж потенциал възниква в процеса на стареене на органа, който играе важна роля в патогенезата на заболявания, такива като коронарна болест на сърцето и атеросклероза на долните крайници. Исхемия на тъканите се развива и с множество други заболявания. Въвеждане на ангиогенни фактори при исхемия зона (терапевтичен ангиогенеза) стимулира растежа на кръвоносните съдове в исхемични тъкани и подобрява микроциркулацията поради развитието на обезпечение движение, което от своя страна увеличава функционалната активност на засегнатия орган.

Най-обещаващите за клинично приложение са VEGF и FGF. Резултатите от първите рандомизирани проучвания се оказаха окуражаващи, особено при правилния избор на оптимални дози и начини на прилагане на ангиогенни фактори. В тази връзка е извършена експериментална оценка на ангиогенната активност на екстракт, изолиран от човешка ембрионална мозъчна тъкан. Работата използва аборт материал, получен в двадесетата седмица на бременността и се обработва по метода на I. Maciog и съавтори (1979) в модификацията на ANRF IC. Това лекарство е аналог на "добавка за растеж на ендотелиални клетки" ("Sigma") и е естествена смес от човешки ангиогенни фактори, която включва VEGF и FGF. Експериментите бяха проведени върху плъхове с модели на исхемия на тъканта на задния крайник и миокарда. Въз основа на изследването на активността на алкалната фосфатаза в експериментални животни, лекувани с екстракт ембрионален невронната тъкан, показват увеличение на броя на капилярите на единица площ на миокарда - както на надлъжната и напречна на срезовете на сърцето. Ангиогенна активност на лекарството проявява чрез директно въвеждане в исхемична зона и в случай на системна (интрамускулно) приложение, което води до намаляване на средната площ на след инфаркт белег.

Във всеки вариант на изпълнение, трансплантация на ембрионалното нервна тъкан е изключително важно да се избере правилното гестационен период трансплантиран ембрионален материал. Сравнителен анализ на клетъчни препарати от ембрионален вентралната мезенцефалона 8-, 14- и 16-17-дневни ембриони плъхове три месеца след intrastriarnoy neurotransplantation полово зрели плъхове с паркинсонизъм в автоматизиран тест apomorfinindutsirovannoy мотор асиметрия разкрива клетъчни препарати значително по-висока ефективност на ЦНС ембриони 8 дни а най-малък - на 16-17-дневна ембрионални нервната тъкан. Получените данни са корелирани с анализ на резултатите хистоморфологични, по-специално, с размерите на присадки, глиален реакция тежестта и броя на допаминергични неврони в тях.

Разликите терапевтичен ефект на нервната тъкан клетки на плода може да бъде свързано със степента на ангажимент и незрялост на самите клетки, както и тяхната отговор на различни растежни фактори, които са разпределени в областта на индуцирана щетите допаминергични неврони. По-специално, ефектът на EGF и FGF2 в развитието на нервните стволови клетки ин виво теленцефалона настъпва при различни етапи на ембриогенезата. Невроепителни клетки 8,5-дневни ембриони мишката, когато се култивира ин витро да пролиферират в безсерумна среда в присъствието на FGF2, но не EGF, които реагират само произтичат клетъчна популация изолиран от мозък на ембриони на по-късни етапи на развитие. В същото време, невронни стволови клетки пролиферират в отговор на всяка от тези митогени и растеж адитивно увеличи в случай на прибавяне на FGF2 и EGF в култури от ниско засаждане клетъчна плътност. Смята се, че EGF-реактивен невронни стволови клетки от зародишни зона 14.5-еднодневни ембриони на мишки са линейни потомци на FGF-реактивен невронни стволови клетки, които първо се появяват след 8.5 дни от бременността. Потенциал фенотип невронни стволови и потомствени клетки зависи от комплексното влияние тяхната микросреда. Когато имунофенотипизиране на невронни клетки и хипокампални перивентрикуларните области 8-12- и 17-20-седмична възраст, човешки ембриони с цитофлуорометрия поток показа значителна вариабилност, свързани както с гестационна възраст и индивидуалното конституционни функции донор биоматериала. Когато култивиране на невронни прекурсорни клетки в свободна от серум среда със селективен EGF, FGF2 и NGF невросфери образувани при скорост по същество независима от бременността. Клетки от различни области на мозъка 5-13 седмици човешки ембрион в кратък период на отглеждане с FGF2 в монослойни култури на ламинин субстрат в присъствието на следи от растежни фактори, поддържащи пролиферация в продължение на 6 седмици с висок процент nestinpozitivnyh клетки на фона на спонтанна формиране на клетки с маркери за всичките три линии нервна диференциация. Клетките, изолирани от човешки ембрион мезенцефалона през бременността над 13 седмици, за да се размножават под влиянието на EGF и също са невросфери. Чрез използване на комбинация от EGF и FGF2 се постига синергичен ефект. Най-силен пролиферацията на нервните стволови клетки се наблюдава появата на невросфери, когато се култивират тъкан мозъчната кора на 6-8-седмична възраст, човешки ембриони в присъствието EGF2, IGF1 и 5% конски серум върху субстрат с фибронектин.

Трябва да се отбележи, че въпросите, свързани с гестационна възраст и Министерството на ембрионална тъкан на централната нервна система е за предпочитане да се използва за целите на Neurotransplantation остават отворени. Отговорите се намират в развиващия мозъка неврогенезата, която продължава през целия период пренатална - в рамките на времето, когато епитела на невралната тръба образува структура многослоен. Смята се, че източник на стволови клетки и нови неврони радиална глиални клетки се състои от продълговати клетки с дълги процеси, радиално насочени спрямо стената на мозъчни везикули и в контакт с вътрешната повърхност на вентрикулите и външните стени на церебрална повърхност Пия. По-рано радиални глия надарени само функция на невроналната пътища, чрез които миграцията на neuroblasts от вентралната повърхност в раздели, и дава рамка роля във формирането на правилната ламинарен организацията на кората на главния мозък. Днес е установено, че тъй като развитието на радиалния глия е трансдиференцирано в астроцити. Голяма част от него се намалява при бозайници след раждането, но тези видове животни, при които радиалната глия бъде отстранен чрез зряла възраст neyronogenez активни потоци и в постнаталния период.

В културата на клетки от радиални глиални ембрионални неврони неокортикалните образува гризачи и глиални клетки, и в развитието на бременността на ембриони от 14 до 16 дни (за периода на максимален интензитет neyronogeneza в кората на главния мозък на мишки и плъхове), формирани предимно неврони. На 18-ия ден на ембриогенезата, диференциацията се измества към образуването на астроцити със значително намаляване на броя на новообразуваните неврони. Обозначение на място радиални глиални клетки, използващи GFP оставя да се открие мехурчета в кухина мозъчни 15-16-дневни ембриони на плъхове асиметрично разпределение на белязани клетки с появата на дъщерните клетки с имунологични и електрофизиологични характеристики на neuroblasts. Трябва да се отбележи, че според резултатите от динамични наблюдения произтичащи neuroblasts използва майка клетката радиални глиални клетки да мигрират към повърхността на PIA.

Ендогенният маркер на радиалния глия е протеинът на междинните нишковидни нишки. Чрез флуоресцентно клетъчно сортиране чрез поточна белязано с ретровирус, свързани с GFP и експресиран под контрола на нестин, той показа, че стволовите клетки на назъбения гирус регион на хипокампуса и хилус лице (материал бе получен при операция за епилепсия) изрази нестин. Следователно те се отнасят до радиалния глия, който при хората, както и при другите бозайници, се запазва само в зъбния циркус.

Въпреки това, ефективността на клетъчната трансплантация зависи не само висока жизнеспособност на донорни клетки и техния потенциал и диференциране функция замени дефектни клетки, но предимно насочено миграция. Това зависи от способността на миграция пълна функционална интеграция на трансплантирани клетки - без да се счупи на мозъка cytoarchitectonics получател. Тъй като радиален глиални клетки в послеродовия период е почти изцяло изложена на намалението, трябва да разберете как възрастни получателите на донорски клетки могат да се движат от областта на трансплантацията в центъра на увреждането на мозъка. Има две версии на миграция на клетки в централната нервна система, независими от радиалната глия: феномена на тангенциален миграция или движение на neuroblasts в развитието на мозъчната кора, перпендикулярна на радиалната глиални мрежа, както и миграцията на "низ" или "верига". По-специално, миграция на невронни клетки предшественици на ростралния субвентрикуларната зона се среща в обонятелния като поредица от тясно съседни клетки, заобиколени от глиални клетки. Смята се, че тези клетки използват партньори клетки като миграция субстрат, такъв като основен регулатор на взаимодействията клетка-клетка е PSA-NCAM (невронни адхезионни молекули polisialirovannaya клетки). Следователно, миграцията на невроните не изисква непременно участието на радиална глия или съществуващи аксонални връзки. Vneradialnaya форма на движение клетка "низ" на ростралното миграционен поток се поддържа през целия живот, което показва реалната възможност за целенасочено доставяне на трансплантирани невронни клетки предшественици в зряла нервна система.

Съществува хипотеза за наличието на стволови клетъчни линии в онтогенезата на мозъка, според който в ранните етапи на стволови клетки развитието на мозъка са клетки на невроепител, които са в процес на зреене в transdifferentiate радиалната глия. В зряла възраст ролята на стволовите клетки се осъществява от клетки, които имат признаци на астроцити. Въпреки редица спорни въпроси (противоречия по отношение на стволови клетки на хипокампуса, както и дълбоките части на мозъка, които нямат слоеста структура на кората и разработването на таламуса могили, където радиалното глия отсъства), ясна и проста концепция на наследството на фенотипа на стволови клетки по време на онтогенезата външен вид много привлекателен.

Фактори на въздействието на микросредата в определянето и последващото диференциацията на нервните клетки differon ясно демонстрира чрез трансплантация на зрели гръбначния мозък стволови клетки в различни части на плъхове зряла нервна система. Когато стволовите клетки бяха трансплантирани в зъбния гирус или в областта на миграция на неврони на обонятелните луковици, беше наблюдавана активна трансплантация на клетките до множество неврони. Трансплантация на стволови клетки в гръбначния мозък и областта на хипокампуса доведе до образуването на астроцити и олигодендроцити, докато при трансплантация в назъбения гирус се образува не само глиални клетки, но също така неврони.

При сексуално зрял плъх броят на разделящите клетки в зъбния циркус може да достигне няколко хиляди на ден - по-малко от 1% от общия брой зърнени клетки. Невроните представляват 50-90% от клетките, астроцитите и други глиални елементи - около 15%. Останалите клетки нямат антигенни признаци на неврони и глии, но съдържат антигени на ендотелиални клетки, което показва тясна връзка между невроногенезата и ангиогенезата в зъбния циркус. Поддръжниците на възможността за диференциране на ендотелиални клетки в невронни прогениторни клетки се отнасят до способността на ендотелиоцитите in vitro да синтезират BDNF.

Впечатляващо скорост самосглобяване на невронни мрежи: в процеса на диференциация на прогениторни клетки мигрират гранули клетки в назъбения гирус и образуват зеле отглеждане към зоната SAZ хипокампални синапси и образуващи с глутаматергичната пирамидални неврони и инхибиторна вмъкнат. Новосъздадените зърнени клетки, интегрирани в съществуващите невронни вериги за 2 седмици, а първите синапсите вече се появяват 4-6 дни след появата на нови клетки. По-рядко приложение зрял животински BrdU или 3Н-тимидин (един начин за идентифициране на възрастни стволови клетки) открити голям брой маркирани неврони и астроцити в хипокампуса, което предполага възможността за образуване на нови неврони не само в назъбения гирус, но също и в други части на хипокампуса. Интересът към процесите на делене, диференциация и смърт на клетките в назъбен гънка на хипокампуса на мозъка, зрял, дължащи се на факта, че възникващите тук неврони са локализирани в един от ключовите места на хипокампуса, отговорни за ученето и паметта процеси.

Така, днес установено, че от клетки subependimnoy зона на латералния вентрикул зрели гризачи възникне невронни-предшественик клетките мигрират по ростралния миграционен поток, оформени надлъжно ориентирани астроглиални клетки на обонятелната луковица, където те са вградени в слоя на зърна клетки и се диференцират в неврони, които структура. Миграцията на прогениторни невронни клетки са намерени в Rostral мигриращи маймуни поток възрастни, което предполага възможността за образуване на нови неврони в обонятелната луковица на примати. Невронни стволови клетки, изолирани от обонятелния възрастни и преведени в линия, клонирани клетки, които се диференцират в неврони, астроцити и олигодендроцити. Стволовите клетки са намерени в зрелите мозъчни хипокампуса на плъхове, мишки, маймуни и хора. Невронни стволови клетки subgranular зона на назъбен фасцията са източник на прекурсорни клетки, мигриращи в междинни и странични рамена на хипокампуса, където те се диференцират в зрели зърнени клетки и глиални елементи. Аксони образувани де ново назъбена извивка неврони, водят началото си поле саз, което показва, че новообразуваните невроните, участващи в изпълнението на хипокампуса функции. В асоциативни областта на неокортекса на възрастни маймуни мозъчни намерено прекурсорни клетки от неврони мигриращи от субвентрикуларната зона. Новият слой VI на кората на главния мозък пирамидални неврони нов мишки разкрива чрез 2-28 седмици след индуцират увреждане и смърт на неврони нативни този слой, поради миграцията dormantnyh ранни прогениторни клетки в субвентрикуларната зона. И накрая, в реалността на следродилната neyronogeneza в човешкия мозък показва двукратно увеличение в броя на неврони, продължава през първите 6 години след раждането.

Незначително значение за практическата клетъчна трансплантация е въпросът за регулирането на процесите на възпроизводство и диференциация на нервните стволови и предродови клетки. Най-високата стойност между факторите, които потискат пролиферацията на нервните стволови клетки имат глюкокортикоид, който драстично намалява броя на деленията, а отстраняването на надбъбречната жлеза, напротив, значително увеличава броя на митоза (Gould, 1996). Забележително е, че морфогенезата на назъбения гирус при гризачи е най-интензивно през първите две седмици на постнаталното развитие при липса на реакция на стрес, на фона на рязък спад в производството и секрецията на стероидни хормони на надбъбречната кора. Кортикостероиди инхибират миграцията на гранули клетки - нови неврони не са вградени в зърнестия слой на назъбения гирус, и хилуса остане. Предполага се, че процесите на образуване на синаптични връзки са едновременно нарушени. Защита на клетки от такива "стероид агресия", извършвани от минимум експресията на минерални и глюкокортикоидни рецептори на пролифериращи клетки зърна не само по време на развитието на назъбения гирус, но също така и в зрели животни. Независимо от това, на всички неврони в хипокампални неврони на мозъка се характеризира с високо съдържание на глюкокортикоидния рецептор, който причинява стрес на хипокампуса. Емоционален стрес и стресови ситуации притесняват neyronogenez и хроничен стрес драстично намалява способността на животните да се научат нови умения и обучение. По-ясно изразеният негативен ефект от хроничния стрес върху невроногенезата е напълно разбираем, като се има предвид преобладаващо латентно състояние на нервните стволови клетки. Когато обездвижване на бременни плъхове (гризачи - супрамаксимален стрес фактор) е зададено като пренатална стрес също води до намаляване на броя на клетките в назъбения гирус и значително инхибира neyronogenez. Известно е, че глюкокортикоиди са включени в патогенезата на депресивни състояния, което е еквивалентно морфологичен спиране neyronogeneza, патологични невронална преструктуриране и interneuronal връзки, както и смъртта на нервните клетки. От друга страна, антидепресанти химиотерапевтични средства активират образуването на неврони в де ново, което потвърждава връзката между процесите на образуване на нови неврони в хипокампуса и развитието на депресия. Значително въздействие върху neyronogenez са естроген, последиците от които са противоположни на действието на глюкокортикоиди и са в подкрепа на пролиферацията и оцеляването на невронни клетки предшественици. Трябва да се отбележи, че естрогените значително увеличават способността на животните да се учат. Някои автори с влияние на естрогените свързват цикличните промени в броя на зърнените клетки и превишават броя им при жените.

Известно е, че контролира neyronogenez EGF, FGF и BDNF, обаче механизмите на външни сигнали за стволовите клетки от митогени и фактори на растежа са достатъчно проучени. Установено е, че поддържа PDGF ин витро невронални линия прогениторни клетки и цилиарен невротрофичен фактор (CNTF), като трийодтиронин стимулира образуването на предимно глиални клетки - астроцити и олигодендроцити. Хипофизата аденилил циклаза-активиращ протеин (РАСАР) и вазоактивен интестинален пептид (VIP) активиране на пролиферацията на нервните стволови клетки, но инхибират диференциацията обработва дъщерни клетки. Опиоидите, особено в случай на продължителна експозиция, значително инхибират невроногенезата. Въпреки това, стволови клетки и невронни прародителски клетки-предшественици на назъбения гирус не се разкрива опиоидни рецептори (които присъстват в диференциране неврони в ембрионален период), които не позволяват да се направи оценка на директни ефекти на опиоиди.

Нуждите от практическа регенеративна и пластична медицина принуждават изследователите да обърнат специално внимание на изследването на плури- и мултипотентността на стволовите клетки. Реализирането на тези свойства на нивото на регионалните стволови клетки на възрастен организъм в дългосрочен план би могло да осигури разработването на необходимия трансплантационен материал. Преди е показано, че епигенетични стимулиране на нервните стволови клетки осигурява пролифериращи клетки, вече заготовки от нервни фенотипове, което ограничава техния брой. В случай на тотипотентен ембрионални стволови клетки свойства пролиферация до достатъчен брой клетки настъпва по-рано невронната диференциация, клетките се размножават и лесно превърнати до невронна фенотип. За невронни стволови клетки PGCs, изолирани от вътрешната клетъчна маса на бластоцисти култивирани с и задължителното присъствие LIF, която запазва тяхната totipotency и способността да се разделят за неопределено време. След това ретиновата киселина се индуцира чрез невронна диференциация на ESC. Така трансплантация получава невронни стволови клетки в увредената хинолин и 6-хидроксидопамин стриатума придружава от тяхната диференциация в допаминергични и серотонинергични неврони. След въвеждане в вентрикулите на мозъка на ембриони на плъхове невронни прародителски клетки, получени от PGCs мигрират към различни области на мозъка на получателя, включително кора, стриатум, преградата, таламуса, хипоталамуса, и малкия мозък. Клетките, оставащи в камерна кухина, епителни структури, наподобяващи форма на невралната тръба, както и индивидуални острови neneyralnoy тъкан. В паренхима на мозъка на ембриона на реципиента трансплантираните клетки произвеждат три основни типа клетки в нервната система. Някои от тях имат удължени апикални дендрити, пирамидални клетъчни тела и базови аксони, които се простират в калозен корпус. Астроцитите донорен произход простират процесите до близките капиляри и олигодендроцити са тясно в контакт с миелин ръкави, които участват в образуването на миелин. По този начин, невронни стволови клетки, получени от ин витро PGCs, способни на насочване на подходящи миграцията и диференциация сигнали регионално микросреда осигурява много области на развиващите мозъчни неврони и глия.

Някои автори разглеждат възможността за де- и регионално трансдиференциация на зрели стволови клетки. Косвено потвърждение на дедиференциирането на клетки в култура с разширяването на техните активности са данни за присаждане на нервни стем клетки в мишки костен мозък с последващото развитие на тези клетъчни линии, които дават функционално активни клетки от периферна кръв. Освен това, трансплантация на генетично белязаните (LacZ) невросфери клетки, получени от зрял или ембрионален мозък, в мозъка на облъчени мишки с миелосупресия, води до образуването на стволови клетки не само нервни производни, но също води до образуването на кръвни клетки, което показва, че плурипотентни невронни стволови клетки, реализирани извън мозъка. По този начин, невронни стволови клетки могат да се диференцират в кръвни клетки под влиянието на сигнали от костен мозък микросреда временно трансформация в хематопоетични стволови клетки. От друга страна, за трансплантация на костен мозък хематопоетични стволови клетки в мозъка зададен диференциация под влиянието на микросредата на мозъчната тъкан в клетките глиални и нерв. Следователно, потенциалните диференциална rovochny невронни и хематопоетични стволови клетки не са ограничени тъкан специфичност. С други думи, местните микросреда фактори, различни от характеристиката на тъканите мозък на мозъка и костите може да промени ориентацията на диференциацията на тези клетки. Показано е, че невронни стволови клетки инжектирани в венозната система на облъчени мишки, създадени в далака и костния мозък популация от миелоидна, лимфоидни и незрели хематопоетични клетки. Ин витро Ефектът на костен мозък морфогенни протеини (BMP) за оцеляването и диференциацията на нервните стволови клетки се определя, както в ранните етапи на ембриогенеза в развитието на невронната или глиални посоки. Културите на нервните стволови клетки на 16-дневни ембриони на плъхове BMPs индуцират астроглиални и неврони, докато в култури от стволови клетки, получени от перинатална мозъчни астроцити образувани само. Освен това, BMPs потискат образуването на олигодендроцити ин витро, които се появяват само при добавяне на ногин антагонист BMPs.

Процеси присъщ vidonespetsifichnost трансдиференциация: хематопоетични стволови клетки са човешки костен мозък трансплантирани в стриатума на възрастни плъхове, мигрират в бялото вещество на външния капсулата, ipsi- и контралатералния неокортекса, където те образуват astrotsitopodobnye клетъчни елементи (Azizi и др, 1998). В алотрансплантация на костен мозък стволови клетки в латералния вентрикул на неонатален мишки миграцията на хематопоетични стволови клетки могат да бъдат проследени в предния мозък и церебрални структури. В стриатума и молекулното слой на хипокампални мигрирали клетки трансформирани в астроцити и в обонятелната луковица, вътрешният слой на церебрални гранулирани клетки и образуването на мозъчния ствол ретикуларната да образуват невронни клетки с положителна реакция на неврофиламенти. След интравенозно инжектиране на хематопоетични клетки на възрастни мишки GFP-белязан микро- и астроцити са открити в неокортекса, таламуса, мозъчния ствол и малкия мозък.

В допълнение, мезенхимни стволови клетки от костния мозък, която води до всички видове клетки на съединителната тъкан, при определени условия, може също претърпяват невронна трансдиференциация (припомни, че източникът на ембрионалното мезенхим са невралната тръба клетки). Показано е, че стромални клетки човешки костен мозък и миши култивирани ин витро в присъствието на EGF или BDNF, Експресна маркер на невронни клетки предшественици нестин, и добавяне на различни комбинации от растежни фактори води до образуването на клетки с маркери глиални (GFAP) и неврон (ядрен протеин Neun). Белязаните сингенни мезенхимни стволови клетки се трансплантират в латералния вентрикул на мозъка на новородени мишки, мигрират и са разположени в предния мозък и малкия мозък без счупване цито-архитектура на мозъка получател. Костен мозък мезенхимни стволови клетки се диференцират в зрели астроцити в стриатума и молекулното слой на хипокампуса, както и населяват обонятелния, малкия мозък и гранули слоеве ретикуларната образуване, които се превръщат в неврони. Мезенхимните стволови клетки от човешки костен мозък могат in vitro да се диференцират в макроглии и след трансплантацията да се интегрират в структурите на мозъка на плъх. Директен трансплантация на костен мозък мезенхимни стволови клетки в хипокампуса на възрастен плъх и се придружава от миграцията им в мозъчния паренхим и neuroglial диференциация.

Предполага се, че трансплантацията на стволови клетки от костен мозък може да разшири възможностите за клетъчна терапия за заболявания на ЦНС, характеризиращи се с прекомерна патологична смърт на неврони. Трябва да се отбележи, обаче, че не всички учени признават факта на взаимно преобразуване на невронни и хемопоетични стволови клетки, особено в условията ин виво, което е отново поради липсата на надеждни маркери за оценка на тяхната трансдиференциация и по-нататъшно развитие.

Трансплантацията на стволови клетки открива нови хоризонти за клетъчната генна терапия на наследствената неврологична патология. Генетичната модификация на невронни стволови клетки включва въвеждане на регулаторни генетични конструкти, чиито продукти взаимодействат с протеини на клетъчен цикъл в режим на автоматично управление. Трансдукцията на такива гени в ембрионални прогениторни клетки се използва за умножаване на нервните стволови клетки. По-голямата част на генетично модифицирани клетъчни клонове се държи като стабилни клетъчни линии, които показват признаци на трансформация ин виво или ин витро, но притежава изразена способност да се свържете с инхибиране на пролиферацията. Когато бъде умножен трансплантация на клетки, трансфектирани покрай вградени в тъканта на пациента, без да се счупи cytoarchitectonics и без процес на злокачествена трансформация. Донори нервните стволови клетки не се деформира зона интеграция и еднакво се състезават за място с домакина прогениторни клетки. Въпреки 2-3-ия ден на интензитет разделяне трансфектанти клетки драстично намалена, което отговаря на инхибиране на контакт на пролиферацията ин витро. В получателя на ембриона нервните стволови трансфектанти още няма аномалии на централната нервна система, всички области на мозъка са в контакт с присадката, се развиват нормално. След трансплантацията, клоновете на невронни стволови клетки бързо мигрират от областта на приложение и често преминават съответните зародишни зони ростралния тракт адекватно интегрират с други области на мозъка. Вграждане на генетично модифицирани клонинги и заразени клетъчни линии на нервните стволови клетки в мозъка на организма на гостоприемника е характерно не само за ембрионални период: тези клетки се имплантират в няколко зони CNS плода, новороденото, възрастни и дори стареене организъм получател и изложба в същото време способността за адекватна интеграция и диференциация. По-специално, след трансплантация в кухината на мозъчните вентрикули трансфектирани клетки мигрират без увреждане на кръвно-мозъчната бариера и са интегрални компоненти на клетъчна функционална мозъчна тъкан. Невроните на донора формират подходящите синапси и изразяват специфични йонни канали. При запазване на целостта на бариера астроглиални деривати стволови клетки трансфектанти през кръвно-мозъчната невронни простира процеси на мозъчните кръвоносни съдове и олигодендроцити донорен произход изрично миелин базичен протеин и myelinating невронални процеси.

В допълнение, нервните стволови клетки се трансфектират за използване като клетъчни вектори. Такива вектори генетичен конструкции осигуряват стабилни ин виво експресия на чужди гени, участващи в развитието на нервната система или се използват за корекция на генетичен дефект, тъй като продуктите на тези гени са в състояние да компенсира различни биохимични аномалии на ЦНС. Силно мигриращи дейност на заразените стволовите клетки и адекватна имплантиране в растежните зони на различни региони на развиващия се мозък да ни позволи да се надява на пълно възстановяване на наследствена недостатъчност на клетъчни ензими. Когато моделиране синдром, атаксия-телангиектазия (линия мутант мишки PG и ППР) Purkinje клетки от малкия мозък изчезват експериментални животни по време на първите седмици на постнаталното развитие. Показано е, че въвеждането на нервни стволови клетки в мозъка на такива животни е придружено от тяхната диференциация в Purkinje клетки и гранулирани неврони. При PCD мутантите координацията на движенията се коригира частично и интензивността на тремора намалява. Подобни резултати се получават при трансплантацията на клонирани човешки нервни стволови клетки при примати, при които дегенерацията на Purkinje клетки се индуцира от онканаза. След трансплантацията бяха намерени донорни нервни стволови клетки в грануларните и молекулярни слоеве, както и в Purkinje клетъчния слой на церебралния паренхим. Следователно, генетичната модификация на невронните прогениторни клетки е в състояние да осигури стабилна, ангажирана модификация на фенотипа, който е устойчив на външни влияния. Това е особено важно при патологични процеси, свързани с развитието на реципиента на фактори, възпрепятстващи преживяването и диференциацията на донорните клетки (например, с имунна агресия).

Мукополизахаридоза тип VII при хора, характеризиращо се с прогресивна невродегенерация, и забавено умствено развитие, че в експерименти с мишки моделирани заличаване мутация на ген, бета-глюкуронидаза. След трансплантация в мозъчните вентрикули на новородени мишки дефицитни получател трансфектирани невронни стволови клетки, секретиращи бета-глюкуронидаза, донорни клетки са открити в първия терминал областта и след това разпределени на церебрална паренхим стабилно korrigiruya цялост лизозомна в мозъка на мутирали мишки. В модела на Tay-Sachs заболяване трансдуцирани с ретровирус невронни стволови клетки в утробата приложение в миши ембрион и новородени мишки трансплантация осигурява ефективна експресия на бета-субединицата на бета-хексозаминидаза в реципиенти с мутация, която води до анормално натрупване на бета 2-ганглиозид.

Друга област на регенеративната медицина е за стимулиране на пролиферация и диференциация потенциал пациента собствени невронни стволови клетки. По-специално, невронни стволови клетки секретират NT-3 в разрез по мезиалната равнина на гръбначния мозък и мозъчна асфиксия плъховете експресират NGF и BDNF в преградата и базалните ганглии, тирозин хидроксилаза - в стриатума и релин - малкия мозък и миелин основен протеин - в мозъка ,

Въпреки това, проблемите на стимулация neyronogeneza платени не е достатъчно внимание. Малкото произведения показват, че функционалното натоварване върху нервните центрове, отговорни за отличителни миризми, се отразява във формирането на нови неврони. Трансгенни мишки с дефицит на невронни адхезионни молекули neyronogeneza намаляване на интензивността и намаляване на броя на мигриращи неврони в обонятелната луковица е свързано с нарушена способност да дискриминира миризми, въпреки че прагът на миризма и краткосрочна обонятелната памет не се нарушава. В регулация играе важна роля neyronogeneza функционален статус на клетките на назъбения гирус: отслабването ефект на излагане на глутамат-зърна след разрушаването на клетките на енторинален кортекс допринася за пролиферацията и диференциацията на неврони и влакна перфорантните стимулация (първични аферентни вход на хипокампуса) предизвиква инхибиране neyronogeneza. Антагонисти на NMDA-активирани рецептори процеси туморни неврони, като агонисти, обратно, намалява интензивността neyronogeneza този смисъл наподобява действието на глюкокортикоиди. В специализираната литература са противоречиви резултати от изследвания: информация за експериментално доказани инхибиторни ефекти на възбуден невротрансмитер глутамат да neyronogenez не съответства на данните за стимулиране на развъдните прогениторни клетки и появата на нови неврони, чрез увеличаване на изземване дейност в хипокампуса на животни с експериментални и каиновата pilocarpic модели на епилепсия. В същото време, на традиционния модел на епилепсия, предизвикана от повтаряща подпраговото стимулация на определени области на мозъка (разпалване) и се характеризира с по-малко тежка загуба на неврони neyronogeneza интензивност се увеличава само в късната фаза на подпалки, когато наблюдава при увреждане на хипокампуса и смъртта на неврони. Показано е, че при епилепсия активност припадък стимулиране neyronogenez с анормална локализация на нови гранулирани неврони, много от които се появяват не само в назъбения гирус, но също така и в хилус. Тези неврони са важни за развитието на покълване на мъхести влакна, аксоните, тъй като те са отсъстват от нормални колатерали обратен образуване синапси с множество съседни зърна-клетки.

Използването на регионални нервни стволови клетки отваря нови перспективи за използване на клетъчна трансплантация при терапията на метаболитни и генетични невродегенеративни заболявания, демиелинизиращи заболявания и пост-травматични разстройства на функциите на ЦНС. Преди да се извърши трансплантацията на заместителна клетка, един от методите избира и разширява необходимия тип невронни прогениторни клетки ех vivo с цел тяхното последващо въвеждане директно в увредената област на мозъка. Терапевтичният ефект в този случай се дължи на заместване на повредени клетки или локално освобождаване на растежни фактори и цитокини. Този метод на регенеративно-пластична терапия изисква трансплантация на достатъчно голям брой клетки с предварително определени функционални характеристики.

Подходящ следва да бъдат признати и допълнителни проучвания за молекулни характеристики и регенеративни и пластмасови потенциала на стволови клетки от зрели мозъка, а също и способността да трансдиференциация на регионалните стволови клетки от различни тъкани произход. Днес скринират антигени хемопоетични костния мозък стволови клетки с определяне на комбинацията от маркери на клетки, способни да transdifferentiate в невронни стволови клетки предшественици (CD 133+, 5E12 +, CD34-, CD45-, CD24). Клетки, които образуват in vitro невросфери и образуват неврони, се получават по време на трансплантация в мозъка на новородени имунодефицитни мишки. Интересът към ксенотрансплантологията на клетките е резултат от проучвания върху възможността за трансплантация на кръстосани стволови клетки при индивиди с еволюционно отдалечени таксони. Остава без подходяща интерпретация на резултатите от имплантиране на невронни стволови клетки в областта на мозъчни тумори: трансплантираните клетки активно мигрират през целия обем на тумора, без да излиза извън него, и въвеждането на клетки в непокътнати част от мозъка наблюдава тяхното активно миграция към тумора. Въпросът за биологичното значение на такава миграция остава открит.

Трябва да се отбележи, че успешното трансплантацията на невронни стволови клетки, както и други невронни стволови клетки, получени от hESCs, е възможно само при условията на използване на високо невронни прародителски клетки, недиференцирани ембрионални стволови клетки трансплантация възрастни имунокомпетентни получател неизбежно трансформирани в тератома и тератокарцином. Дори минимално количество слабо диференцирани клетки в увеличения донори клетъчна суспензия драстично и туморогенност присадката недопустимо увеличаване на риска от образуване на тумори или neneyralnoy тъкан. Получаване на хомогенни популации на невронни прародителски клетки е възможно, когато се използва като алтернативен източник на донорна тъкан клетки произтичащи на определени етапи на нормално протичащ ембриогенеза. Друг подход е да се премахне напълно нежелани клетъчни популации от специфична селекция потекло. Опасност също осигурява използването за цел neurotransplantation hESCs на експонация след ин витро с растежни фактори. В този случай, повредата не може да се изключи невронната диференциация програма да образуват структури, присъщи на невралната тръба.

Днес е ясно, че невронни стволови клетки проявяват тропизъм за ЦНС патологични промени и има изразен регенеративен пластмаса ефект. В микросреда в източник клетъчна смърт на нервна тъкан симулира ориентация диференциация на присадени клетки, възстановяване така дефицит на специфични невронни елементи в областта на ЦНС. В някои невродегенеративни процеси възникнат неврогенни сигнали към neyronogeneza на рекапитулацията и зрели нервни стем клетки в мозъка, са в състояние да отговорят на инструктиране информация. Графична илюстрация на терапевтичните възможности на нервните стволови клетки се осигурява от многобройни данни от експериментални изследвания. Интрацистернално клонове приложение на невронни стволови клетки за животни с лигатура на средната церебрална артерия (исхемичен модел инсулт) помага да се намали площта и обема на разрушителни промени в областта на мозъка, особено в случай на трансплантация на нервните стволови клетки с FGF2. Получено от имунохистохимия с миграцията на донорни клетки в исхемичната зона с последващо интеграция с интактни клетки на мозъка получател. Трансплантация незрели невроепителни клетъчни линии MHP36 мишки в мозък на плъх в експерименталната инсулт подобряване сензорно функция и въвеждането на тези клетки в мозъка на вентрикулите подобрява когнитивната функция. В резултат на трансплантация, плъхове заготовки хематопоетични невронни-човешки клетки от костен мозък се отстраняват дисфункция на мозъчната кора, причинени от исхемично увреждане. Така хетероложни невронни прародителски клетки мигрират от мястото на инжектиране в зоната на разрушителни промени в мозъчната тъкан. Интракраниални трансплантация на костен мозък чрез хомоложна травматично увреждане на мозъчната кора на плъхове води до частично възстановяване на двигателната функция. Prizhivlyayutsya донорни клетки пролиферират подложи невронната диференциация в неврони и астроцити и мигрират към лезията. Когато се прилага в стриатума на възрастни плъхове с експериментална инсулт клонирани човешки нервни стволови клетки заменят повредените клетки на централната нервна система и частично възстановяване на функцията на нарушен мозъка.

Човешките невронни стволови клетки са преобладаващо изолирани от ембрионален тенеслефон, който се развива значително по-късно от регионите с по-каудален нерв. Възможността за изолиране на нервните стволови клетки от гръбначен мозък 43-137 дни човешки плода, например в присъствието на EGF и FGF2 тези клетки образуват невросфери и ранните пасажи показват multipotentiality диференциране в неврони и астроцити. Въпреки това, дългосрочно култивиране на нервните стволови клетки (над 1 година) ги лишава мултипотентност - такива клетки могат да се диференцират само в астроцити, т.е., те са unipotent. Регионалните невронни стволови клетки могат да бъдат получени чрез частично bulbektomii и след размножаване в култура в присъствието на LIF трансплантирани на същия пациент с невродегенеративни промени в други части на централната нервна система. Смяната клиника клетъчна терапия с използване на невронни стволови клетки първо се извършва за лечение на пациенти с мозъчен удар, придружен от лезии на базалните ганглии на мозъка. В резултат на трансплантацията на донорни клетки клиничното състояние на повечето пациенти се е подобрило.

Някои автори смятат, че способността на нервните стволови prizhivlyatsya клетки мигрират и да се интегрират в различни области на нервната тъкан е повреден на централната нервна система открива неограничени възможности за клетъчна терапия е не само местните, но и богат (инсулт или асфиксия), multiochagovyh (множествена склероза), а дори и в световен мащаб ( най наследствени метаболитни разстройства или невродегенеративна деменция), патологични процеси. В действителност, когато трансплантиране клонирания невронни стволови мишката и човешки клетки реципиенти животни (мишки и примати, съответно) от дегенерацията на допаминергични неврони в mezostrialnoy система, предизвикано от въвеждането на метил-фенил-tetrapiridina (модел на болестта на Паркинсон) в продължение на 8 месеца преди трансплантацията, донорски невронни стволови клетки интегриран в централната нервна система на реципиента. Един месец по-късно, трансплантираните клетки са разположени двустранно по средния мозък. Част от получената невронален произход изразява tirozingidrolazu донор в отсъствието на имунен отговор на трансплантация. При плъхове, лекувани с 6-хидроксидопамин (друг експериментален модел на болестта на Паркинсон), адаптиране към микросредата на трансплантираните клетки в мозъка гостоприемник се определя чрез култивиране условия на невронни стволови клетки преди трансплантация. Невронни стволови клетки бързо пролифериращи ин витро под влиянието на EGF, компенсира дефицита на допаминергични неврони в стриатума на повреден по-ефективно от клетки от 28-дневни култури. Авторите смятат, че това се дължи на загуба на способността да възприема сигнали на съответната диференциацията време на клетъчното делене ин витро-невронни клетки предшественици.

В някои изследвания се опитва да подобри въздействието на повредени стриатални процеси реинервация чрез трансплантиране в тази област на ембрионални клетки от стриатума като източник на невротрофични фактори за едновременно трансплантация на допаминергични неврони на вентралната мезенцефалона. Както се оказа, ефективността на невротрансплантацията до голяма степен зависи от метода на вмъкване на ембрионални нервни тъкани. В резултат на изследванията на трансплантация препарати фетален нервна тъкан в вентрикуларната система на мозъка (за да се избегне нараняване стриатума паренхим), получена информация за тяхната положителен ефект върху паркинсонова мотор дефекта.

Въпреки това, в други проучвания, експериментални наблюдения показват, че трансплантация в мозъка вентрикул препарати ембрионален вентралната мезенцефалона невронната тъкан, съдържаща допаминергични неврони като трансплантиране ОАВАергични невронни елементи в ембрионален стриатум на плъх gemiparkinsonizmom не допринася за възстановяването на увредени функции на допаминергичната система. Напротив, имуноцитохимия потвърждава доказателствата за ниско оцеляване на допаминергични неврони на вентралната мезенцефалона, трансплантирани в ивичестото тяло на плъха. Терапевтичният ефект интравентрикуларен трансплантация на ембрионалното вентралната мезенцефалона нервна тъкан реализира само при едновременното имплантиране в денервираната стриатум формулировка на стриатални ембрионални клетки. Авторите предполагат, че механизмът на този ефект е свързан с положителен ефект трофична на ОАВАергични клетки в ембрионални стриатума специфични допаминергичните дейност междукамерни трансплантации вентралната мезенцефалона. Изразено глиални реакция при трансплантация е придружено от лек тест апоморфин показатели регресия. Последното от своя страна корелира със серум съдържание на GFAP, който посочва директно до нарушаване на бариера пропускливостта на кръвно-мозъчната. Въз основа на тези данни, Авторите заключават, че GFAP серум може да се използва като подходяща мярка за функционалното състояние на трансплантацията и повишена пропускливост на кръвно-мозъчната бариера за neurospecific GFAP-тип антиген е патогенетична връзка в развитието на отхвърляне на присадката поради автоимунно увреждане на нервната тъкан на реципиента ,

От гледна точка на други изследователи, присаждане и интеграция на невронни стволови клетки от след трансплантация на стабилна и живот, като донорски клетки се намират в получателя в продължение на най-малко две години след трансплантацията, и без значително намаляване на техния брой. Опитите да се обясни това от факта, че в недиференцирано състояние невронни стволови клетки не експресират МНС клас I и II при ниво, достатъчно да индуцира реакция имунното отхвърляне, може да се счита за валидно само по отношение на слабо диференцирани нервните прогенитори. Обаче не всички нервни стволови клетки в мозъка на реципиента продължават да са в незряло състояние. Повечето от тях преминават диференциация, по време на която се изразяват напълно молекулите на МНС.

По-специално, липсата на ефективност на използване за лечение на експериментални паркинсонизъм лекарства intrastriarnoy трансплантация на ембрионалното вентралната мезенцефалона, съдържащ допаминергични неврони, свързани с лошо оцеляване на трансплантираните dofaminer- кал неврони (само 5-20%), което се причинява от реактивната глиоза, придружаваща местно травма мозъчния паренхим на трансплантация. Известно е, че локално мозъчно нараняване паренхим и свързаните глиоза да доведе до нарушаване на целостта на кръвно-мозъчната бариера с достъп до периферна кръв антиген на нервната тъкан, по-специално неврон и Okara антиген. Наличието в кръвта на тези антигени могат да предизвикат специфични цитотоксични антитела към тях и развиват автоимунен агресия.

Cymbalyuk V. И др (2001) докладват, че тя все още е в сила остава традиционната гледна точка, съгласно която ЦНС е имунологично привилегирована област, изолиран от имунната система на кръвно-мозъчната бариера. В своя преглед на литературата, авторите се позовават на редица произведения, които показват, че тази гледна точка не е в пълно съответствие със същността на имунните процеси в мозъка на бозайниците. Установено е, че маркираното вещество въвежда в мозъчния паренхим може да достигне дълбоко цервикални лимфни възли, и след интрацеребрално инжектиране на антиген в тялото получаване на специфични антитела. Клетките на шийните лимфни възли отговарят на пролиферацията на такива антигени, като се започне от 5-ия ден след инжектирането. Образуването на специфични антитела също се открива при трансплантацията на кожата в паренхима на мозъка. Авторите на прегледа дават няколко възможни начина за транспортиране на антигена от мозъка до лимфната система. Един от тях е преходът на антигените от периваскуларните пространства към субарахноидното пространство. Предполага се, че периваскуларните пространства, локализирани по протежение на големи церебрални съдове, са еквивалентни на лимфната система в мозъка. Вторият начин се намира по протежение на белите влакна - през решетъчната кост в лимфните съдове на носната лигавица. В допълнение, има широка мрежа от лимфни съдове в dura mater. Кръво-клетъчната бариера за лимфоцитите също е много относителна. Доказано е, че активираните лимфоцити са способни да произвеждат ензими, които засягат пропускливостта на структурите на "имунния филтър" на мозъка. На нивото на активираните по-капилярни венули се проникват Т-помощници и през непроменената кръвно-мозъчна бариера. Темата за липсата на клетки, представящи антигена в мозъка, не стои пред критиките. Понастоящем е убедително доказана възможността за представяне на антигени в централната нервна система от най-малко три вида клетки. Първо, те са дендритни клетки от костен мозък, които се локализират в мозъка по големите кръвоносни съдове и в бялото вещество. Второ, антигени са способни на представяне на ендотелните клетки на кръвоносните съдове на мозъка, и във връзка с МНС антигени, който поддържа клонална растеж, специфични за тези антигени Т клетки. Трето, клетките на микро- и астроглиа действат като агенти, представящи антигени. С участието на имунния отговор в ЦНС, астроцити придобиват свойства immunnoeffektornoy клетки и експресират редица антигени, цитокини и имуномодулатори. Когато се инкубира с у-интерферон (у-INF) ин витро астроглиални клетки експресират МНС клас I антигени и II, и стимулирани астроцити са способни на антиген представяне и водене на клонална пролиферация на лимфоцитите.

Мозъчна тъкан травма, постоперативна възпаление, отоци и фибринови отлагания придружаващи трансплантацията на зародишен нервна тъкан, създават условия за увеличаване на пропускливостта на кръвно-мозъчната бариера с нарушена автотолерантност, свръхчувствителност и активиране на SDZ + CD4 + лимфоцити. Авто и представянето на алоантигени извършва астроцити и микроглиални клетки реагиращи на у-INF експресираща МНС молекули, ICAM-1, LFA-I, LFA-3, ко-стимулиращи молекули В7-1 (CD80) и В7-2 (CD86), както и секреция на IL-ла, IL-интраперитонеално и у-INF.

Следователно фактът, че по-дълъг оцеляване на ембрионалното нервна тъкан при интрацеребрално трансплантацията, отколкото в периферния прием едва ли може да се дължи на липсата на започване на трансплантация имунитет. Особено, защото моноцити, активирани лимфоцити (цитотоксични CD3 + CD8 + и хелперни Т-клетки) и цитокини, които те произвеждат, както и антитела срещу антигени периферна трансплантация фетален нервна тъкан играят важна роля в отхвърлянето. Някои значение за създаване на условия за по-трайни резистентност към neyrotransplantatov Т клетъчни имунни процеси има ниско ниво на експресия на МНС молекули в ембрионален нервна тъкан. Ето защо в експеримент имунната възпаление след трансплантация на ембрионални нервна тъкан в мозъка се развива по-бавно, отколкото след присаждане на кожа. Въпреки това, след 6 месеца, има пълно унищожаване на отделните присадки на нервната тъкан. В областта на трансплантацията локализиран предимно Т лимфоцитни ограничение антигени на МНС клас II (Nicholas и сътр., 1988). Установено е експериментално, че за намаляване neurotransplantation ksenologicheskoy на Т-хелперните (L3T4 +), но не и цитотоксични Т лимфоцити (Lyt-2), удължава оцеляването на нерв на плъх тъкан в мозъка на мишките реципиенти. Neyrotransplantata Отхвърляне се придружава от инфилтрация на макрофаги и Т-лимфоцити на гостоприемника. Следователно, макрофаги и активирани микроглиални клетки в акт гостоприемник място като имуномодулаторна антиген представящи клетки, и увеличаване на донорни антигени от клас I експресия МНС повишава цитотоксичната активност убиец получатели Т лимфоцити.

Тя няма смисъл да се анализира многобройни опити да обясни спекулативен neyrotransplantata реакцията на отхвърляне на имунната система на организма реципиент на ендотелни клетки или глиални донори елементи като чисти линии и невронни прародителски клетки претърпяват имунна атака. Интересно съобщение, че механизмите на по-дълъг оцеляване на присадката в рамките на централната нервна система играе важна роля експресия мозък свързване Fas-лиганд апоптоза рецептор (Fas-молекула) на Т лимфоцити инфилтриращи мозъка и индуцират апоптоза, която е типична за защитен механизъм на бариерните автоимуногенни тъкани.

Както е уместно отбележи Cymbalyuk V. И др (2001) Transplantation на ембрионалното нервна тъкан се характеризира с развитието на възпаление, обхващащо чувствителни към мозъка антигени и активирани клетки, антитела, а също и поради местното производство на цитокини. Важна роля играе съществуващо сенсибилизация организъм на мозъчните антигени, което се случва по време на развитието на заболявания на централната нервна система и може да бъде насочен към трансплантация антигени. Ето защо действителната продължително оцеляване хистосъвместимост neyrotransplantatov постигнато само чрез потискане на имунната система чрез прилагане на циклоспорин А или моноклонални антитела към CD4 + лимфоцити на реципиента.

По този начин много проблеми на невротрансплантацията остават нерешени, включително тези, свързани с имунологичната съвместимост на тъканите, които могат да бъдат разрешени само след целенасочени фундаментални и клинични изследвания.