Диагностика на херпес

Диагностика на херпес се основава на поведението на класически Отделянето на вируса в чувствителни клетъчни култури, имунофлуоресценция и серологични методи, извършване на колпоскопия изследвания чрез използване на съвременни молекулярно-биологични методи (PCR, дот-хибридизация), която ви позволява да се диагностицират всички групата на херпес вирус, включително HHV-6 и HHV-7 видове.

Методи за лабораторна диагностика на херпесна инфекция

Основните методи, насочени към секретиране на HSV или откриване на вирусни частици и / или техни компоненти	Помощни методи, насочени към откриване на антитела срещу HSV в биологичните течности на човешкото тяло
Изолиране на HSV в чувствителни култури от клетки и животни Директна и имунна електронна микроскопия Директни и индиректни опции за МФП ИФА Молекулярни биологични методи Латексова аглутинационна реакция	Реакция на неутрализация РСК Определяне на антитела към неструктурни протеини на HSV-1,2

Показано е, че 76% от пациентите имат генитален херпес (GH), причинен от HSV-2, и при 24% - HSV-1 тип. И GG като моноинфекция се наблюдава само при 22% от пациентите, в 78% от случаите са открити микробни асоциации. При 46% от пациентите е открита паразитоценоза, причинена от два патогена, включително 40% от случаите на хламидии. По-рядко в парчетата се определят гардерели, трихомона, гонококи.

При 27% от пациентите паразитоценозата е представена от три и от 5,2% от четири патогени. И по-често имаше комбинация от хламидии с гъбички Gardnerella и Candida. Тези данни оправдават необходимостта за цялостно бактериологично изследване на пациенти YY за идентифициране комбинации патогенен агент, както и по-задълбочено проучване на патогенезата на смесени инфекции на урогениталния тракт, което ще даде възможност за диференцирано комплексна терапия на HSV инфекция.

Материали, които трябва да бъдат изследвани при изолирането на HSV в зависимост от локализацията на херпесните лезии

Локализация на лезиите	Съдържание на везикули	Отстраняване на клетки				SMZ	Аспирирайте от бронхите	Биопсия образец	Кръв
		1	2	3	4
Кожа	+								+
Очи			+						+
Гениталии				+					+
Анус	+				+				+
Уста	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Бели дробове		+					+		+
Черният дроб								+	+
Вродена херпес	+	+	+				+		+

Методи за лабораторна диагностика на цитомегаловирусна инфекция

Методи	Времето, необходимо за получаване на резултати	Бележки
Вирусологичен
Електронна микроскопия	3 часа	Малодоступен
Изолиране на вируса в клетъчна култура (CPD)	4-20 дни	Стандартно, бавно
Имунофлуоресцентно оцветяване на ранен АН с моноклонални антитела	6 часа	По-малко специфични
ЦИТОЛОГИЧЕСКИЙ	2-3 часа	По-малко специфични
СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ
РСК	2 дни	Стандарт
Ssubsistence	1 ден	Отнемащ много време
RIF	6 часа	Опростен, специфичен
ФРПИ	6 часа	Комплекс
RIMF	6 часа	Комплекс
ИФА (IgМ, ДО)	6 часа	Бързо, просто
Имуноплоскост	6 часа	Скъп
Молекулно биологична
MG	5-7 дни	Колко струва, отнема много време
PCR	3 часа	Скъп

Методи за диагностициране на вируса на херпес зостер

Диагностични методи	Лабораторни техники
INDIRECT
Разпределяне	Тъканна култура, пилешки ембриони, лабораторни животни, ко-култивиране с разрешителни клетки или помощни вируси
Идентификация на изолатите	Реакция на неутрализация, DSC, IF, IPPE, реакция на преципитатни изолати, аглутинация, IF
ПРАВ
Цитология	Смеси: цветна имунофлуоресценция
Хистология	Патоморфология на клетката
Структура	Ембрионална микроскопия, имуноелектронна микроскопия
Определяне на антигени	IF, PIÉF, RIM, IFA
Определяне на местно производство на антитела	Ig М, Ig G, Ig А: ИФА, РИА
Молекулярни биологични подходи	Молекулярна хибридизация, PCR

Лабораторна диагностика на инфекция, причинена от вируса на херпес зостер

Диагностични проблеми	Методи	Очаквани резултати
Остра първична инфекция	1	Откриване след 2 часа
	2	Нивото на антителата расте бавно
	3	Представете се 3 дни след заразяването
Остра реактивирана инфекция	1	Откриване на ULV за 2 часа
	2	Нивото на антителата расте бавно
	4	Представете се 4 дни след появата на обриви

1. определянето в течността на везикули на WIEF;
2. серология: DSC, ELISA, насочени към идентифициране
3. Серология: ELISA, насочени към откриване на IgM;
4. серология: ELISA, насочени към откриване на IgA, IgM.

Методи за индикация на имунния отговор на инфекция, дължаща се на вируса на херпес зостер

Подход	Метод
Откриване на повишен титър на антителата във втория серум	RSK, RTGA, RPGA, реакция на неутрализация IF, RIM, ELISA
Откриване на Ig G, Ig A клас специфични антитела в първата серумна проба	ИФА, ИФ, РИМ, латекс-аглютинация

Тълкуване на резултатите от серологичното изследване на серуми на пациенти върху херпесвирусни инфекции (ELISA)

Име на инфекцията / маркера	Средни прагове за инфекции
	Резултати от анализа	Интерпретация
Цитомегалия Анти-CMV IgG (1-20 Е/мл) Анти-CMV IgM (100-300%)	Положителни 1-6 положителни 6-10 позитивни> 10 отрицателни положителни 100-300 отрицателни <90 съмнителни 90-100	Ремисия Агресия на болестта Остра фаза на заболяването Без инфекция (болест) Остра фаза на заболяването Повторете анализа след 2-3 седмици
Херпес прост 1,2 серотипове Общо анти-HSV 1/2. (100-900%)	Положителни 100-400 Положителни 400-800 Положителни> 800 Отрицателни <100	Ремисия Агресия на болестта Остра фаза на заболяването Няма инфекция (болест)

Таблицата представя основните методи за лабораторна диагностика на херпесвирусни инфекции и препоръчва биологични материали, които се изследват за изолиране на HSV, като се отчита локализацията на херпесните лезии

Надеждно е разпределението на херпес симплекс и CMV чрез инфекция на чувствителни клетъчни култури. По този начин, при вирусологично изследване на 26 пациенти в периода на рецидив, HSV е изолиран в чувствителна Vero клетъчна култура в 23 случая (88,4%). В заразените култури се наблюдава модел на цитопатично действие, характерно за HSV - образуването на много ядрени гигантски клетки или натрупването на закръглени и уголемени клетки под формата на гроздове. В 52.1% от случаите е възможно да се открият огнища на цитопатичния ефект на вируса до 16-24 часа след инфекцията. До 48-72 часа инкубация на заразените култури, процентът на материалите, причиняващи специфично клетъчно разрушаване, се увеличи до 87%. И само в 13% от случаите, положителните резултати са открити 96 часа след инфекцията и повече или с повторно пасажиране.

Методи за лабораторна диагностика на генерализирана херпесна инфекция

Основните методи, насочени към откриването (изолирането) на херпесвирусите, техните частици и техните компоненти	Помощни методи, насочени към откриване на антитела срещу херпесни вируси в биологични флуиди, откриване на ензимни промени в кръвния серум
Изолиране на херпес вирус на чувствителни клетъчни култури и животински Direct и имунната електронна микроскопия Директен метод и индиректен имунопероксидазен изпълнения преки и непреки опции техника флуоресцентно антитяло варианти ELISA изпълнения на молекулна (ДНК-ДНК) хибридизиране полимеразна верижна реакция реакция латекс аглутинация	Неутрализация реакция за свързване на комплемента реакция латекс аглутинация Непряко флуоресцентен метод антитяло изпълнение Индиректен вариант имунопероксидазен метод Изпълнения ELISA метод имунната попивателна радиално фиксиране на комплемента Метод Определяне на аланин и аспартат нива

За диагностицирането на инфекциозна мононуклеоза (инфекция, причинена от VEB) се използват серологични методи. Реакция Paul-Bunnelya с овчи еритроцити, титъра на 01:28, диагностика и по-горе за едно проучване серум, или 4-кратно увеличение антитяло при разглеждането сдвоен серуми. Използвайте реакцията на Goff-Bauer със суспензия от 4% формализирани червени кръвни клетки на коня. Резултатът се взема предвид след 2 минути, при инфекциозна мононуклеоза реакцията е силно специфична.

Понастоящем се разработва ензимен имуноанализ (ELISA) за диагностициране на инфекциозна мононуклеоза. В този случай IgG и IgM антителата в серума на пациента се определят чрез инкубирането му с лимфобласти, инфектирани с EBV, последвано от третиране с флуоресцентни антитела. В острия период на заболяването, антителата срещу вирусния капсиден антиген се определят при титър 1: 160 и по-висок.

При използване на брой на внесените системи търговски изпитване в IFA може да идентифицира: антитела срещу мравки обвивката антитела Egan EBV до началото на антиген на EBV, общата антитялото ранен антиген на EBV, определени в острата фаза на болестта и в ядрото и в цитоплазмата, а ограничен антитяло EBV рано, определена в острата фаза на болестта и в ядрото и в цитоплазмата на клетки, ограничена антитела EBV ранен антиген, определени в средата на заболяването само в цитоплазмата на клетки и антитела на EBV ядрен антиген. Използването на тези системи за изпитване позволява диференциална диагностика на редица заболявания, свързани с EBV.

След положителен ELISA за идентифициране на антитела EBV дават имуноблот потвърждаващ отговор, който се открие присъствието на антитела да се разделят EBV маркерни протеини (р-протеини): P23, P54, р72 (присъствието на протеина предполага възможността за възпроизвеждане EBV), стр 138. Споменатата горните лабораторни методи се използват за контролиране на ефективността на лечението.

Чувствителността на вирусологичните методи е 85-100%, специфичността е 100%, времето на изследване е 2-5 дни. Често на практика се използва методът на директна имунофлуоресценция (PIF) с поликлонални или моноклонални антитела срещу HSV-1 и HSV-2. Методът UIF може лесно да се възпроизвежда в конвенционална клинична лаборатория, не е скъпо, чувствителността е над 80%, специфичността е 90-95%. Чрез имунофлуоресцентна микроскопия показа присъствието на цитоплазмени включвания, морфологични характеристики, процентът на инфектираните клетки в петна, ожулвания уретрата, цервикален канал, шийката на матката, ректума.

Методът UIF дава представа за морфологичните свойства на клетките и за промени в локализацията на HSV антигени. В допълнение към директните признаци на увреждане на клетките от херпес вируси (откриване на специфична луминесценция), има индиректни признаци на херпесна инфекция според данните на UIF:

• агрегация на ядрено вещество, ексфолиране на кариулма;
• присъствието на т.нар. Ядра "дупки", когато остава само една кариолема от ядрото на клетката;
• наличието на вътрешно ядрени примеси - телето на Саудри.

При определянето на UIF лекарят получава не само качеството, но и количествена оценка на инфектираните клетки, които са били използвани, за да се оцени ефективността на антивирусна терапия с ацикловир (AC). По този начин, 80 пациенти с прост генитален херпес (GG) са изследвани чрез метода на UIF в динамиката. Показано е, че, ако преди лечение с ацикловир в намазки 88% от пациентите имат висок процент на заразените клетки (50-75% и по-горе), след един курс на ацикловир в намазки 44% от пациентите със здрави клетки, открити в 31% от случаите са отбелязани отделните инфектираните клетки и 25% от пациентите са имали до 10% от инфектираните клетки.

Съдържанието на заразените клетки в смазки (PIF реакция) при пациенти с генитален херпес, лекувани с ацикловир

Периоди на болестта	Процент в намазките
	Инфектирани клетки					Нормални клетки
	Повече от 75%	50-75%	40-50%	10%	Единични клетки в n / sp
Рецидив (преди лечението)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Ремисия (след лечение)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Използването на много години на взаимен фонд, както и метода на дот-хибридизацията наблюдавани почти 100% от споразумението между резултатите от проучването. Трябва да се отбележи, че за да се увеличи надеждността на диагностика на GH, особено в случаите, когато има субклиничен и malomanifestnyh форми на херпес, се препоръчва да се използва методът на лабораторна диагностика 2-3, особено при разглеждането на бременни жени, жени с акушерска история в неравностойно положение, хора с неопределена гинекологични диагноза.

По този начин, за PCR диагностика на вирусни и бактериални инфекции на урогениталния тракт е необходимо да се направи оценка на положителните резултати, получени с историята, наличието (или отсъствието) на специфични клинични симптоми. Ако хламидията се открие с PCR, тогава в този случай е възможно да се говори за инфекция и съответно да се решат проблемите на терапията. В случай на откриване на микоплазми (ureaplasmas) са опортюнистични патогени, за да се потвърди диагнозата е необходимо за провеждане на култивиране по-нататъшни проучвания, т. Е. Crop материал от чувствителен на пациента към клетъчни култури. Само когато са получени положителни резултати в анализа на културата, можем да говорим за лабораторно потвърждение на диагнозата микоплазмоза. Същият метод ще позволи, ако е необходимо, да се определи чувствителността на изолираните микоплазми към често използвани лекарствени форми (антибиотици, флуорохинолони и др.).

Може би едностепенна инфекция с няколко вируса от семейство Nepresviridae. Често откриваме инфекция на един пациент с вируси HSV-1, HSV-2 и CMV. Много по-често инфектирани с няколко херпесни вируса са пациенти с клинични и лабораторни прояви на вторични IDS (пациенти с онкохематологични, онкологични, заразени с ХИВ). По този начин се демонстрира, че клиничните и имунологични разстройства, прогресиращи при HIV инфекция, са придружени от увеличение на броя на херпесвирусите, открити чрез метода на молекулярната хибридизация. В този прогностично най-значителен може да се разглежда комплексна едноетапна детекция на ДНК на HSV-1, CMV и HHV-6 тип.

[1], [2], [3]